《分光光度》.ppt

第7章 吸光光度法
概述
吸光光度法基本原理
分析方法和仪器
显色反应及影响因素
光度分析法的设计
吸光光度法的误差
吸光光度法的应用
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吸光光度法：分子光谱分析法＝ b c
工作曲线法
(校准曲线)
朗伯-比尔定律的分析应用
0 c(mg/mL)
A
。 。 。 。
*





Ax
cx
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标准比较法：
As =  b cs （标准样品)
Ax =  b cx （待测样品)


注意: 用比较法测定时，所用标准溶液浓度应与待测
溶液的浓度相接近，且实验条件应相同。
五、吸光度的加和性与吸光度的测量
A = A1 + A2 + … +An
用参比溶液调T=100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。
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方便、灵敏，但准确度差，常用于限界分析。
分析方法和仪器
一、目视比色法
观察方向
空白
c1
c2
c3
c4
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二、光电比色法
光电比色计结构示意图
通过滤光片得一窄范围的光(几十nm)
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滤光片
吸收滤光片：只允许指定的窄范围波长光通过，其他波长的光均被吸收。
选择滤光片的原则：
滤光片透光率最大的光是溶液吸收最大的光, 即滤光片的颜色与有色溶液的颜色互补。
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三、 分光光度法和分光光度计
通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光，
波长可调, 故选择性好, 准确度高。
光源
单色器
样品池
检测器
读出系统

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常用光源
光源
波长范围(nm)
适用于
氢灯
185~375
紫外
氘灯
185~400
紫外
钨灯
320~2500
可见，近红外
卤钨灯
250~2000
紫外，可见，近红外
氙灯
180~1000
紫外、可见（荧光）
能斯特灯
1000~3500
红外
空心阴极灯
特有
原子光谱
激光光源
特有
各种谱学手段
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氙灯
氢灯
钨灯
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单色器
作用:产生单色光
常用的单色器：棱镜和光栅
样品池（比色皿）
厚度(光程): , 1, 2, 3, 5…cm
材质：玻璃比色皿－－可见光区
石英比色皿－－可见、紫外光区
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检测器
作用：接收透射光，并将光信号转化为电信号
常用检测器：
光电管
光电倍增管
光二极管阵列
光电管分为红敏和紫敏，阴极表面涂银和氧化铯为红敏，适用625－1000nm波长；阴极表面涂锑和铯为紫敏，适用200－625nm波长
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1)单光束分光光度计


光源
单色器
吸收池
检测器
显示
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2) 双光束分光光度计
双光束型可以消除光源强度变化的影响。
比值
光源
单色器
吸收池
检测器
显示
光束分裂器
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多通道仪器（Multichannel Instruments）
光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管)
photodiode arrays (PDAs)
同时测量200～820nm范围内的整个光谱, 比单个检测器快316倍,信噪比增加3161/2 倍.
3) 其他类型分光光度计
纤维光度计
将光度计放入样品中, 原位测量. 对环境和过程监测非常重要.
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显色反应及影响因素
要求：
a. 选择性好
b. 灵敏度高 (ε>104)
c. 产物的化学组成稳定
d. 化学性质稳定
e. 反应和产物有明显的颜色差别 (l>60nm)
没有颜色的化合物，需要通过适当的反应定量生成有色化合物再测定－－ 显色反应
一、 显色反应
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二、 显色反应的影响因素