穿心莲内酯衍生物的急性毒性实验.doc

穿心莲内酯衍生物的急性毒性实行
　　张越华，曾宁静，陈东风
　　【摘要】目的运用生物活性指纹图谱猜测别的中药可否促进骨髓间充质干细胞〔bnearresenhyalsteells,bSs〕。要领龟版浸膏依次用石油醚、乙醚、二氯甲烷提取，得作用的结果。于是我们思量研究龟版浸膏G-S生物活性指纹图谱。用TT比色法和流式细胞仪检测了溶剂提取物的干细胞活性，结果表白3个溶剂提取物均能促进鼠bSs的体外增殖。接纳G-S技能研究每一个提取物，根据总离子流色谱图，得到促进bSs增殖的龟版浸膏溶剂提取物G-S指纹图谱〔简称为提取物指纹图谱〕，目的在于运用生物活性指纹图谱猜测别的中药可否促进bSs增殖。
　　1东西与要领
　　
　　TraeDSQ型气相色谱-质谱联用仪〔美国FinniganIN公司消费〕，EPISXL-L型流式细胞阐发仪〔美国ULTER公司消费〕，全部试剂均为阐发纯，龟版浸膏由广东中医药大学提供。
　　，别离用250l石油醚、乙醚、二氯甲烷加热回流24h后，分出各溶剂提取物，天然挥干后，得到溶剂提取物样品，别离记为石油醚提取物〔Z-1〕、乙醚提取物〔Z-2〕、二氯甲烷提取物〔Z-3〕；各称取30g溶剂提取物样品提供做促进鼠bSs的体外增殖实行，称取10g用二氯甲烷定容供做G-S阐发。
　　-S实行条件
　　色谱条件为DB-5石英毛细管柱(30×),载气为氦气，柱前压50kPa，进样口温度为280℃。升温步伐：60℃(不保存)，以8℃/in升至280℃，保存20in。质谱条件：Ei源，离子源温度250℃，轰击电子能量70ev，，质量扫描范畴28～500au。联结：直接式。
　　用bSs法测Ss增殖。所得数据用±s表现，接纳方差阐发。用流式细胞仪阐发检测细胞周期的变革。
　　2结果
　　
　　bSs增殖活性用TT法测定bSs增殖活性〔D值〕。见表1。表1TT法测定bSs活性(略)
　　由图1〔横坐标表现样品及浓度，如“Z-1-〞表现Z-，别的同〕可见，Z-1，Z-2，Z-3均能促进bSs增殖，有些浓度的D值暂缺，由于在测试历程细胞受污染，未能得到正确的D值。
　　
　　bSs活性为了证实TT结果的正确性，我们抽取Z-1样品用流式细胞仪阐发测试，比较组及样品组对bSs活性的影响见〔图2～3〕。碱性成纤维生长因子〔bFGF〕阳性比较组浓度为20ng/l，Z-。-1样品组能促进bSs增殖，与TT结果同等。
　　
　　G-S生物活性指纹图谱根据石油醚、乙醚、二氯甲烷提取物样品〔即Z-1，Z-2，Z-3〕和总离子流色谱图，寻出雷同保存时间的色谱峰及相应峰面积，取均匀峰面积，各保存时间及峰面积见表2。以保存时间(in)为横坐标，以均匀峰面积A为纵坐标〔×106〕，，见图4。表2提取物指纹图谱数据〔略〕
　　
　　用提取物指纹图谱猜测中药汤剂“四物汤〞的生物活性。四物汤是中药熟地黄、当归、白芍药、川芎4味中药的复方