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实验操作指导书:尿素(脲)抑制蔗糖酶的实验.docx


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八)尿素(脲)抑制蔗糖酶的实验
抑制剂与酶的活性部位结合,改变了酶活性部位的结构或性质,引起酶活力下降。根据 抑制剂与酶给合的特点可分为可逆与不可逆抑制剂。可逆抑制剂与酶是通过共价健结合,不 能用透析等物理方法解除。这二种抑制剂类型可以通八)尿素(脲)抑制蔗糖酶的实验
抑制剂与酶的活性部位结合,改变了酶活性部位的结构或性质,引起酶活力下降。根据 抑制剂与酶给合的特点可分为可逆与不可逆抑制剂。可逆抑制剂与酶是通过共价健结合,不 能用透析等物理方法解除。这二种抑制剂类型可以通过实验进行判断。实验方法为:在固定 抑制浓度的情况下,用一系列不同浓度的酶与抑制剂结合,并测定反应速度。以反应速度对 酶浓度作图,根据曲线的特征即可判断之。
在可逆抑制类型中可分为竞争性抑制,非竞争性抑制和反竞争性抑制三种:
竞争性抑制:
在竞争性抑制中,酶既可以与底物结合,又可以与抑制剂结合,但却不能与二者同时结 合,即有ES和EI,而不存在ESI。其动力学特征是表观值K '增加,而最大反应速度V 不
m max
V max[S ]
I [I]
K (1 + ) + [ S}
mK
变,公式为:
K' = K (1 + 辺)
mmK
表观米氏常数Km'为:
已知抑制剂浓度[I],由斜率计算出抑制剂常数K[,即可算出表观米氏常数Km'o
非竞争性抑制:
在非竞争性抑制中,酶可以与底物和抑制剂同时结合,形成EIS,但EIS不能进一步转
变为产物。其动力学特征是V
max
降低而Km不变,公式为:
V max[S]
V = max^
'(1 + 凶)(K + [ S ])
Km
V' — max
max [ J ]
1+—
KI
表观最大反应速度V '为:
max
已知[I],由斜率计算出K],即可计算出表观V '

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  • 时间2022-07-19