倍他福林对地塞米松诱导大鼠胰岛素抵抗作用.doc

倍他福林对地塞米松诱导大鼠胰岛素抵抗作用
【摘要】目的:探讨倍他福林(Betaphrine)对地塞米松诱导大鼠的胰岛素抵抗作用及其机制。方法:隔日肌肉注射地塞米松1mg/kg,共3周,复制胰岛素抵抗模型,同时用不同剂量的倍他福林素抵抗大鼠模型[1]。成模标准:。
实验分组:共分6组,每组8只。
①正常对照组:(隔日肌注等体积的生理盐水,共3周)
②模型组:(隔日肌注地塞米松1mg/kg,共3周,)
③倍他福林低剂量组:(造模同时灌胃7mg/kg/d倍他福林,共3周)
④倍他福林中剂量组:(造模同时灌胃20mg/kg/d倍他福林,共3周)
⑤倍他福林高剂量组:(造模同时灌胃60mg/kg/d倍他福林,共3周)
⑥盐酸吡格列酮组: (造模同时灌胃20mg/kg/d盐酸吡格列酮,共3周)
标本的采集与处理
末次给药后禁食12小时,%水合氯醛腹腔麻醉。股动脉取血于试管中,37度水浴静置30分钟,以3 500 r/min离心10 min,分离血清,于一70℃冰箱内保存以检测血糖,甘油三酯,胰岛素的含量。血糖,甘油三酯,胰岛素含量的检测按照试剂盒的说明操作。
法测定肝脏组织葡萄糖转运蛋白-4的表达
应用组织裂解液提取各组细胞总蛋白,BCA法测定各组总蛋白浓度。分装,一80℃ 保存。各组样品分别取总蛋白30μg,加热变性,经10%十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳后转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,用含5%的脱脂奶粉的TBST缓冲液封闭同时加GLUT-4多克隆的一抗(1:300),室温2小时。用含吐温-20的TBST缓冲液洗膜(10min×3次),然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗(1:1000),室温孵育2小时,用含吐温-20的TBST缓冲液洗膜(10min×3次),ECL化学发光发检测条带。β-actin作为内参。采用quantityone 图像分析系统采集图像并行半定量分析。
统计学分析
结果均以均数加减标准差(χ±s)表示,,P<。

2 结果
血糖,甘油三酯,胰岛素含量的测定
结果发现,倍他福林可以降低血清中的葡萄糖,甘油三酯,胰岛素的量,提示倍他福林可以改善胰岛素抵抗。 westernblotting 方法测葡萄糖转运蛋白-4的表达
与空白对照组相比,模型组葡萄糖转运蛋白-4的表达减少。倍他福林可以增加葡萄糖转运蛋白-4的表达,同吡格列酮的作用相当。(图 a 上方的条带是葡萄糖转运蛋白-4,下方的条带是内参β-actin)
3 讨论
IR是一种异常的病理生理状态,是许多临床疾病或病征,尤其是常见的内分泌代谢疾病,如糖尿病、肥胖症、高血压和动脉粥样硬化等的共同危险因素[2]。大量研究表明,糖皮质激素地塞米松具有损伤胰岛素调节葡萄糖分布的能力,从而引起胰岛素靶组织对葡萄糖的摄取、利用减少,导致胰岛素抵抗。本实验证明了地塞米