实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价.pdf

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实验三 微生物检，置 5℃冰箱中保存，可使用 6个月。
制备：取直径约 90mm、高 16-17mm的平底双碟，分别注入加热融化
的培养基 I 20ml,使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。另取培
1养基适量加热融化后，放冷至 50-60℃，加入菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为
度）,摇匀，在每 1双碟中分别加入 5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置水
平台上冷却后，在每 1双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管（内径 ±，高
±，外径 ±）4个，用陶瓦圆盖覆盖备用。
三、二剂量检定法
取照上述方法制备的双碟不得少于 4个，在每 1双碟中对角的 2个不锈钢小管
中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液，其余 2个小管中分别滴装相应的高低两
种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为 2：1或 4：1。在 35-37℃条件下培养
14-16小时后，测量各个抑菌圈的直径（或面积），照生物检定统计法中的()法
进行可靠性测验及效价计算。
四、硫酸庆大霉素的效价测定：
配制：精密称取硫酸庆大霉素标准品适量，加乙醇溶解后，用
灭菌水制成每 1ml中含 1000单位的溶液，作为贮备液，置 5℃以下的冰箱中保存，
可使用 7日。将贮备液加 ，使标准品高剂量溶液和低剂量
溶液每 ml中分别含硫酸庆大霉素 10U和 5U。
配制：取硫酸庆大霉素肠溶片 4片，研细，用乙醇适量（硫酸
庆大霉素约 ，用乙醇 25ml），分次研磨使硫酸庆大霉素溶解，并用水稀释成每
1ml中约含 1000单位的溶液，摇匀，静置，精密量取上清液适量，按（1）法 同法
配制，使供试品高剂量溶液和低剂量溶液按标示量计算每 ml中含硫酸庆大霉素分别
为 10U和 5U。
： 按二剂量检定法测定效价，计算出供试品中含硫酸庆大霉素相当于
标示量的百分数。
附录：生物检定统计法中的（）法
抗 生素微生物检定法是以微生物为工具，不可避免地存在着较大的生物差异性，
2因此，必须借助于生物统计方法来减少生物差异对检定结果的影响，使结果达到一
定的精确度。英、美、日等国家药典附录中都详细地制定了生物检定方法的实验设
计和统计分析，并根据生物统计的要求规定了各个品种的误差范围。中国药典从
1985年版起增加了生物检定法的实验设计和可靠性测验及误差估计等内容，这对判
断检验质量及促使检验方法的改进等方面都具有重要意义。

抗生素微生物检定法按照观察的方法和生物反应的类型属量反应，即观察每一
反应本身所表现的程度，可以用量来表示。实验设计采用供试品（T）和已知效价的
标准品（S）对比试验的平行线原理。由于平行线测定的计算原理是在一定剂量范围
内 T和 S的对数剂量与反应或反应的特定函数呈直线关系以及在 T和 S两条直线互
相平行（当 T和 S的活性组分基本相同时）的基础上，因此，可靠性测验就是运用
统计方法来验证实验结果是否符合量反应的平行线设计原理，是否显著偏离了直线
性和平行性，以便评价实验结果的可靠性。对不是显著偏离平行偏离直线（在一定
的概率水平下）的实验结果，认为可靠性成立，方可按有关公式计算供试品的效价