白细胞基因组DNA00.docx

血中DNA的提取
血液中DNA提取的原理：如果以外周血为DNA提取材料，在外周血中提取DNA就是从有 核的白细胞中提取DNA。因此，从外周血中提取DNA包括以下几个关键步骤：第一，破坏 红细胞，通常利用红细胞与白细胞膜结构的差异，先使红细
三、注意事项
所有用品均需要高温高压，以灭活残余的DNA酶。
所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
用大口滴管或吸头操作，以尽量减少打断DNA的可能性。
用上述方法提取的DNA纯度可以满足一般实验（如Southern杂交、PCR等）目的。 如要求更高，可参考有关资料进行DNA纯化。
基因组DNA的检测
取3口1 D耐样品在債8%琼脂糖凝胶中进行电泳，在紫 外灯下观察电泳结果，检测基因组DNA的完整性。
称取适量的琼脂糖，加入到盛有100ml 0, 5 x TBE的烧 杯中，在微波炉上加热至融化*室温放置；
当温度降为约60匸时将胶倒入胶托中，根据需要插入 适当宽度的梳子，制成适当厚度的凝胶；
待凝胶凝固后将梳子拔出，将凝胶放入电泳槽申'向 槽中加入0. 5 x TBE电泳缓冲液，液面没过点样孔； 将提取的基因组DNA样品与上样缓冲液按5 : 1的比例混 合均匀，加入点样孔,70V电压电泳lh;
电泳结束后将凝胶放入10mg/ml 溶液中，染色2如冷,
紫外灯下观察电泳结果.
裂解灯细胞
2 .1按1:5的比例加入RBC裂斛液+混育均匀，揺匀，放賈1 0 mip- 3 G 0 0转/ 分。［1 ｛熾初血滙量，就是上刻度管孙而的数值h 3 裂轉液）］
2 .2在桌面上铺一层紙巾，去#±ffi夜（倒入水池片 高曲倒扣在纸巾上，1。付钟* 注蕙師止不同刼度管之间怕血泽苒熱
4,2-2^作一按* 起.
裂解白钿胞
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（注JM按I： 1 ^.JOI^AWBC裂解濮 ”行®厦皑 育衣釣3帥価）
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沉淀蛋白质
［将覩琳好的瘩液至于4度冰箱预冷I 0分钟
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，转移到斷离心输，車复离右一状“
捉 IRON A
（沉提蛋白质后* 沁上淸转移到新的剰度离呛管，编号和上面同样才确保一一对应J ： 1 ffJltjJl加入痒丙爵（血样酢籾 异丙静），上下崩倒1 0 -2 015：,直到看见 劉状核醱沉淀
£ 0 D转/分丁 1 0分钾
，去掉上稱液，
5A在沉淀中加Ah 0 0^17 0%乙职 . 芸键是转-移絮狀樓战沆锭。
5 5离心，8 0 0 0^/^- 3 - 5分钟'此时换小捣心机*
5$，离心谕倒孙在纸巾上丫沆淀自然干燥
I 5 0 - 2 0 0 u J T 0度温育3 0 - G 0汕钟