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不确定度
LaPO4:Eu3+-BSA中BSA含量测定的不确定度评定
实验目的
采用荧光分光光度计对系列LaPO4:Eu3+标记的BSA标准溶液进行测定，绘制校准曲线，然后对未知BSA含量的溶液进行测量，根据校准曲线从而确定该。
体积引入的相对标准不确定度
容量瓶量取体积有3个主要影响因素: 校准、重复性和温度。
(1) 校准误差引入的不确定度
根据JJ G19621990的规定, A级100mL容量瓶的最大允许误差为± ,按均匀分布, 包含因子k=，由校准引起的标准不确定度为：
V1=/=
(2) 重复性引入的不确定度
,按均匀分布, 由重复性引起的标准不确定度为：
V2=/=
(3) 温度变化引入的不确定度
由于实验室温度在(20 ±4) ℃波动, ×10 - 4 /℃，×10-6/℃（可忽略），因此由温度引起的体积变化区间为±100×4××10-4 =±，按均匀分布，则温度变化引起的标准不确定度为：
V3=/=
由于移液管移取的溶液经过稀释后对吸光度的影响可忽略不计, 因此其带来的不确定度不计入, 所以由体积引起的标准不确定度由以上三部分组成：
uV100 =
= =
合成温度和时间引入的相对标准不确定度
严格按照产品标准和操作规程进行测定, 环境温度、水浴温度和水浴时间带来的不确定度可忽略不计。在规定的时间(30 min) 内完成测量, 则由测量时间带来的不确定度可忽略不计。
荧光强度引入的相对标准不确定度
(1) % ,～ , 按均匀分布, 其引起的标准不确定度为：
/=
(2) 波长的重复性为±3 nm , , 按均匀分布, 其引起的不确定度为：
/=
综上, 操作中吸光度测定所带来的不确定度为：
u ( A ) ==
工作曲线引入的相对标准不确定度
取11个10mL离心管中，×10-3 mol·L-1 LaPO4:Eu3+溶液， mol·L-1 ， 100 μg·mL- 100 μg·mL-1的NHSS，在振荡器中振荡15 min。向以上离心管中分别加入0、5、10、25、50、100、150、200、250、350、400μL 100 μg·mL-1的BSA, ，再放入振荡器中振荡30 min。如此得到一系列LaPO4:Eu3+标记的BSA溶液。以未加BSA的LaPO4:Eu溶液吸光度为零的溶液作为参比溶液, 在波长253 nm处, 用荧光分光光度计测定系列标准溶液的荧光强度I, 结果见表1。分析实验点，利用BSA的浓度小于12 μg·mL-1的9个实验点作一元线性回归方程得到的回归方程为I=+，