碱性磷酸酶米氏常数的测定-3学时.ppt

碱性磷酸酶米氏常数的测定-3学时
三、[试剂与器材]
1． 基质液
2．／L碳酸盐缓冲液pH10(37℃)
3．碱性溶液
4．％铁氰碱性磷酸酶米氏常数的测定-3学时
三、[试剂与器材]
1． 基质液
2．／L碳酸盐缓冲液pH10(37℃)
3．碱性溶液
4．％铁氰化钾
5．％ 4-氨基安替比林
6．37℃恒温水浴锅
7．可见光分光光度计
四、[操作步骤]
1. 底物浓度对酶促反应速度的影响
(2)加入血清后，各管混匀并且立即记录时间，将上述各管置37℃水浴中准确保温15分钟。
(3)保温结束，。
(4)％ 4-，％ ，充分混匀，放置10分钟，以6号空白管作对照，于510nm波长处比色测定。
(5)以各管基质浓度的倒数1/[S]为横坐标，以各管吸光度的倒数作为1/V作纵坐标，作图求出Km值。
[结果与计算]
（A）
：吸光度、1/A、1/[S]
，由图得出Km值。
（一）   Km值测定的意义
，Vm = 1/2 Vmax，Km = [S]
Km是指底物的浓度，含义：Km值等于酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度。
2. Km值可表示酶对底物的亲和力。
Km值愈小，酶与底物的亲和力愈大；表示不需要很高的 底物浓度便可容易地达到最大反应速度。
，只与酶的结构、酶所催化的底物和反应环境相关，与酶的浓度无关。
各种酶的Km值范围很广。-100mmol/L间；对于同一底物，不同的酶有不同的Km值；多底物反应的酶对于不同底物也有不同的Km值。
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