蛋白质含量测定——双缩脲试剂法试验报告.docx

南方医科大学
生物化学实验报告
姓 名：
学 号：
专业年级：
组 另I」：
生物化学与分子生物学实验教学中心
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实验名称
蛋白质含量测定一一双缩月尿试剂法
实验日期 实验地点
合作者
南方医科大学
生物化学实验报告
姓 名：
学 号：
专业年级：
组 另I」：
生物化学与分子生物学实验教学中心
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实验名称
蛋白质含量测定一一双缩月尿试剂法
实验日期 实验地点
合作者 指导老师
评分 教师签名 批改日期
一、实验目的
、操作；
；
13熟悉血清总蛋白的临床意义；
。
二、实验原理
.两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩月尿（H2N-OC-NH-CO-NH2 ）,因分子内含有 两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与 Cu2+发生双缩月尿反应，生成紫红色络合物。
蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-）,同样能在碱性条件下与 Cu2+ 发生双缩月尿反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10~ 120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：
实验材料：
实验试剂：①小牛血清；②；③双缩月尿试剂：硫酸酮、洒石 酸钾钠、碘化钾；④蛋白质标准液（70g/L）;⑤%NaCl;⑥蒸储水。
实验器材：①试管；②烧杯；③容量瓶；④加样枪；⑤刻度吸管；⑥玻璃棒
;⑥1100分光光度计；⑦电子天平；⑧水浴锅。
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实验步骤
l3k 3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） B （空白） S （标准） U （待测）
小牛血清（1:10 - -
蛋白质标准液（1:10） - -
%Nacl - -
L 双缩月尿试剂
一 a各管混匀，观察各试管颜色； 一
,观察颜色；
，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm,
以空白管调零，测S和U管吸的光度；
I ，将比色杯中的样品回收进试管。 ）
血清总蛋白（
依据公式算出结果:
A ..
蛋白质标准液浓度（
A S
g/L)
四、结果与讨论：
.实验现象：
①选取三支洁净无损的试管，从左往右依次加入 %氟化钠溶液、蛋白质标准液、
,分别命名为B试管、S试管和U试管，再分别向三支试管内 加入4ml的双缩月尿试剂，溶液均成蓝色透明状。
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②将三支试管放入37c水浴锅中加热20min,取出后，B试管呈淡蓝色，S试管和
U试管均成浅紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色深。（如图一）
图二分光计读数
图一水浴后三支试管颜色
.实验数据
测定次数






平均吸光度
结果计算：代入公式：血清总蛋白（g/L）=（Au/As）X蛋白质标准液浓度（g