DNS法测定总糖和还原糖.doc

实验九总糖和复原糖的测定（二）
──3,5－二硝基水杨酸法
一、目的要求：
掌握复原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定复原糖的方法。
二、实验原理:
在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝
实验九总糖和复原糖的测定（二）
──3,5－二硝基水杨酸法
一、目的要求：
掌握复原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定复原糖的方法。
二、实验原理:
在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与复原糖共热后被复原生成氨基化合物。在过度的
NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，复原糖的量与光吸
收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
OHNO2
OHNH2
HOOC
+复原糖
HOOC
NO2
NO2
(DNS)
（3－氨基－5－硝基水杨酸）?
黄色
桔红色
三、试剂和器材
1、试剂
（1）1mg/ml葡萄糖标准溶液：正确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至
100ml，即含葡萄糖为ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取g3,5—二硝基水杨酸并量取262ml2mol/LNaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182g
酒石酸钾纳溶于500ml水中），再加5g结晶酚和5g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000ml贮于棕色瓶中。
3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
4）6NNaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
5）%酚酞指示剂。
（6）6mol/LHCl溶液
2、材料
小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材
分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法
1、葡萄糖标准曲线制作
取8支15mm×180mm试管，按下表加入
ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号
试剂
0
1
2
3
4
5
6
7
8
葡萄糖标准液(ml)
0
蒸馏水(ml)
水杨酸溶液(ml)
葡萄糖含量(mg)
0
将各管溶液混淆均匀，在开水中加热
5min，取出后立刻用冷水冷却到室温，
再向每管加入ml
蒸馏水，摇匀。
λ=540nm处测定吸
光度
以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品中复原糖的提取
正确称取

小麦（淀）粉，放在
100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2ml)调成糊状，然后加入
40ml
蒸馏水，混匀，于
50℃