高效液相色谱分析.ppt

高效液相色谱分析
经典LC与HPLC比较
HPLC:采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器
HPLC特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便
2022/7/31
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GC与HPLC的比较或阳离子离子交换树脂；
流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；
基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；
阳离子交换：R—SO3-Na+ +M+ = R—SO3-M+ + Na+
阴离子交换：R—NR4+Cl- +X- = R—NR4+X- + Cl-
应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。
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四、离子对色谱ion pair chromatography
原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；
阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子；
阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子；
反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两相间分配。
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五、离子色谱ion chromatography
离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一项技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。
传统离子交换色谱存在着两个难于解决的问题：
(1)需要高浓度淋洗液洗脱且洗脱时间很长；
(2)洗脱后的组分缺乏灵敏、快速的在线检测方法。
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1、离子色谱法原理
离子交换原理，与传统离子交换的不同点：
采用交换容量非常低的特制离子交换树脂为固定相；
细颗粒柱填料，高柱效；采用高压输液泵；
低浓度淋洗液或本底电导抑制（在分离柱后，采用抑制柱来消除淋洗液的高本底电导）；
可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物；
各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。
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2、离子色谱优点
（1）分析速度快
可在数分钟内完成一个试样的分析；
（2）分离能力高
在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物分离；例：使用双柱法，在十几分钟内，可使七种阴离子完全分离。
（3）分离混合阴离子的最有效方法
（4）耐腐蚀，仪器流路采用全塑件，玻璃柱
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3、离子色谱装置类型 suppressed apparatus of IC
抑制型：抑制柱型、连续抑制型
～。
非抑制型: 当进一步降低分离柱中树脂的交换容量(～),使用低浓度、低电离度的有机弱酸及弱酸盐作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸盐等。检测器可直接与分离柱相连，不需抑制柱。
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离子色谱连续抑制装置图
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离子色谱连续抑制原理图
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4、离子色谱的应用 application of IC
阴离子分析:
双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm),
流动相：·L-1 NaHCO3 / mol·L-1 Na2CO3， 流量138 mL/hr。
七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在3～50 ppm。
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六、排阻色谱色谱size- exclusion chromatography
固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)；
原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。
全部在死体积前出峰；
可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离
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第三章高效液相色谱分析法
一、液相色谱固定相
stationary phase of HPLC
二、液相色谱流动相
mobile phase of HPLC
三、分离条件的选择
§3-3