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过氧化氢酶活力的测定实验报告
篇一：过氧化氢酶活性测定
实验29过氧化氢酶活性测定（高镒酸钾滴定法）
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植 物的代谢强度及抗寒、 抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（
冲液少量，研磨成匀浆，转移至 25ml
容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转移至容量瓶中，
并用同一缓冲液定容，4000rpm离心，
上清液即为过氧化氢酶粗提液。
.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照） ，测
,对照为煮死酶液
.5ml; 再加入 H2O2 ,同时计时间， 于30 c恒温水浴中保温10分钟，立即加
入 10%H2SO4 。
. KMnO标准溶3^滴定 H2O2至生现粉红 色（在30分钟内不消失）为终点。
.结果计算：
酶活性用每克鲜重样品在 10分钟内分解H2O2的毫克数
表示：
（A-B）*Vt/V1*
酶活（酶分解的 H2O2 mg/g 鲜重）=
W
式中： A-----对照用 KMnO4 ml数 B -----酶反应
后KMnO4®定ml数
V t----酶液总量ml V 1----反应所用酶液量 mlW—— 样品鲜重（g）
---1ml KMnO4 相当于 H2O2
［注意］.所用KMnO4容液及H2O2溶液使用前要经过标 定， H2O2 要新配制。
实验48过氧化物酶活性的测定（比色法）
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶， 它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密
切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变 化，因此测量这种酶，可以反映莫一时期植物体内代
谢的变化。
一、原理
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，
生成茶褐色物质，该物质在 470 nm处有最大吸收，
可用分光光度计测量 470 nm的吸光度变化测定过氧化 物酶活性。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
马铃薯块茎。
（二）试剂
. 100 mmol / （见附录）。
.反应混合液：100 mmol / L磷酸缓冲液（ ）
50 mL于烧杯中，加入愈创木酚 28以l ，于
磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷
却后，加入30 %过氧化氢19以l ,混合均匀，保
存于冰箱中。
（三）仪器设备
分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL容量瓶，吸
管，离心机。
三、实验步骤
.称取植物材料1g ,剪碎，放入研钵中，加适量
的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 r / min离心15
min，上清液转入100 mL容量瓶中，残渣再用5 mL磷 酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至
刻度，贮于低温下备用。
.取光径1 cm 比色杯2只，于1只中加入反应混 合液3 mL和磷酸缓冲液1mL，作为对照，另1只
中加入反应混合液 3 mL和上述酶液1mL （如酶活性
过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光
度计上测量波长470 nm下吸光度值，每隔1min读数 一次。
四、结果计算
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 AA 470
/［min , g （鲜重）］表示之。也可以用每 min内
A 为1个过氧化物酶活性单位（ u ）
表7K 0
过氧化物酶活性［u/ （ g ・ min ）］=
式中：A A 470 ——反应时间内吸光度的变化。 W 一
一植物鲜重，g。
T ——提取酶液总体积， mL o
s ——测定时取用酶液体积 ，mL o
min
蒲圻贝母 Fritillaria puqiensis et 是贝母属中一新种，其有效成分生物碱含量较高，止咳效果 显著[1,
2]o其中的蒲贝酮碱的效果与可待因相似，且无 成瘾性，已被国家新药办立项进行一类新药开发。但由于蒲 圻贝母以野生为主，连年的采挖已使其资源逐渐枯竭，难以 为新药开发提供资源保证，为此我们对其进行了组织培养。 蒲圻贝母鳞茎切块培养 22d左右，可直接从切片边缘长生多 个小鳞茎，以后小鳞茎逐渐长大。 为了探讨鳞茎发生的机理， 并为研究提高组培贝母鳞茎的生长率，诱发多鳞茎形成的方 法，我们在培养的不同时期取材，对鳞茎形成过程中的可溶 性蛋白，过氧化物酶及酯酶同工酶的酶谱变化进行了分析。
1材料和方法
材料
取自湖北省蒲圻市，经中国药科 大学生药教研室李萍博士鉴定。
新鲜的蒲圻贝