细胞凋亡、细胞周期.ppt

- 细胞凋亡-细胞周期
研究细胞生命活动的流式解决方案
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丁玮
细胞凋亡概述
又称为程序性细胞死亡(Programmed Cell Death) 是机体主动的、高度有序地清除无用细胞的过程。和细胞坏死(Necrosis) 相区别,坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。
薄膜有小泡状形成
细胞凋亡与疾病的关系
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细胞凋亡事件发生表
细胞膜事件
线粒体事件
Caspase事件
细胞核事件
1. 细胞膜变化的检测:Annexin V/PI
磷脂酰丝氨酸(PS) 的检测:早期凋亡
早期凋亡PS检测及结果判定
早期凋亡特征:
磷脂膜(PS)外翻,但是细胞膜保持完整性,因此PI染色为阴性
DNA没有发生断裂
早期凋亡PS检测及结果判定
Annexin V-FITC
PI
细胞膜变化的检测:Annexin V/PI
优点:简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞
样本设置:
1. 空白对照:辅助判断管,即不加Annexin V/PI,但用它调电压的话,电压偏高,即根据它确定的阴阳性界限是偏低的。
2. 单阳样本:诱导凋亡,Annexin V单染,用来调补偿
3. 单阳样本:诱导凋亡,PI单染,用来调补偿
注意事项:
1. 细胞制备或储存时细胞膜损伤,造成假阳性
2. 贴壁细胞消化时避免使用EDTA,螯合钙离子
BD Annexin V 流式检测试剂盒
提供FITC, PE, APC,CY5,, BD Horizon V450, BD Horizon V500等多种荧光标记的Annexin V以及纯净的Annexin V。
Annexin V检测常见问题
1. 是否 Annexin V Kits 可以检测小鼠或其他物种?
Annexin V试剂盒可以检测多种属
2. 这个试剂盒是否可用于贴壁细胞、固定或冻存的细胞、或组织?
No. 上述样本的细胞细胞膜都会或多或少受到损害,这样的样本建议用免疫荧光技术(Cat. No. 550911)
3. 是否与细胞表面标记兼容? CD11B/MAC-1 LY-71
只要Ca离子不影响该表面Marker就可以同时做