《dnafeulgen染色》.ppt

DNA的Feulgen染色法
整理课件
；
2. 掌握Feulgen染色的方法，观察染色结果。
实验目的
整理课件
DNA经弱酸（lmol／L HCI）水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖DNA的Feulgen染色法
整理课件
；
2. 掌握Feulgen染色的方法，观察染色结果。
实验目的
整理课件
DNA经弱酸（lmol／L HCI）水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的配糖键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含DNA的部位呈紫红色阳性反应.
实验原理
整理课件
碱性品红为红色，结构如图1中A，A与能产生SO2的试剂作用后（如偏重亚硫酸钾与盐酸作用，还原出SO2），双链打开，成为无色的Schiff试剂，Schiff试剂的结构如图中B所示，B分子再与2个醛基（DNA水解后释放出的醛基）结合又出现双链，成为结构如图中C所示的化合物，呈紫红色。
整理课件
图1 Feulgen反应的染色原理
整理课件
DNA染色后，除形成紫红色C化合物外，必然有多余的A和B分子，B分子很容易被氧化转变为A有色分子，从而造成伪差。因此必须迅速地多次用现配的SO2水清洗，使A分子转变为无色的B分子，消除染色的伪差。
整理课件
本次实验对照组的设立：①不经稀酸水解；②预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA，而得到阴性反应，从而证明了Feulgen反应的专一性。
整理课件
实验用品
材料 洋葱内表皮
试剂
Carnoy固定液
l mol/L HCl
Schiff试剂
亚硫酸水溶液(漂白液)
%固绿染液
整理课件
实验方法：
取材（洋葱内表皮）
↓
固定 10—15分钟
↓ 对照2
┌──水洗 2分钟 →5%三氯醋酸90度15分钟
对│ ↓ ↓
照│ 水解(1M HCl ) （置室温1分钟后，60℃8分钟）
1 │ ↓
│ 水洗（可省）
│ ↓
└─→反应 ( Schiff s) （暗袋中 40分钟）
↓
洗涤 ( 亚硫酸水) 洗三次，每次5分钟
↓
水洗 5分钟
↓
复染（ ％固绿) 1分钟
↓
水洗
↓
镜检
实验组：细胞核呈紫红色，核仁及细胞质呈绿色
整理课件
，幼嫩，大小合适。
，涂片可用甲醇固定。
。
，无色，强刺激气味，密封，
避光使用保存（6个月）。