实验六细胞核的分离与核酸的鉴定.ppt

实验6 细胞核的分离与核酸的鉴定
（Separation of cell nuclei and identification of nucleic acids）
遵义医学院生物化学教研室
曹桂群
肝组织 ＋ 少许石英砂研磨
%柠檬酸溶液，研磨，双层纱布过滤
肝匀浆，倾入离心管
离心：3000r/min；10′
上层液
沉淀
加入蔗糖柠檬酸溶液
核悬液
沿壁缓铺于8ml 蔗糖柠檬酸液面上
离心：2000r/min；5′
上层液（弃去）
沉淀
核洗液5ml洗涤沉淀，离心：2000r/min，5 ′
上层液（弃去）
沉 淀
初步纯化的细胞核
NaOH溶解细胞核
待测样品
鉴定
实 验 流 程 图
编　 号
1
2
细胞质（滴）
20
-
核　液（滴）
-
20
1mol/LKOH（滴）
20
20
2．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作:
编　　号
1
2
3
细胞质水解液（滴）
20
-
-
核液水解液（滴）
-
20
-
5％三氯醋酸（滴）
10
10
30
3,5一二羟基甲苯液（滴）
30
30
30
：取离心管二支，编号，按下表操作：
（2） 核糖核酸的鉴定
混合各管
沸水浴(10′)
冷却
加入5%三氯醋酸 (8ml)
搅匀后离心
2000r/min；5′
上清液
立即混合各管
沸水浴(10′)
冷却
比较各管颜色
2．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作:
：取离心管二支，编号，按下表操作：
编　号
1
2
细胞质（滴）
20
-
核　液（滴）
-
20
1mol/L过氯酸(滴）
20
20
编　　号
1
2
3
细胞质水解液（滴）
20
-
-
核水解液（滴）
-
20
-
1mol/L过氯酸（滴）
20
二苯胺试剂（滴）
20
20
20
（3）脱氧核糖核酸的鉴定
混合各管
冷却
离心
上清液
立即混合各管
冷却
比较各管颜色
2000r/min;5′

试管编号
1
2
3
现　象
试管编号
1
2
3
现　象

1．规范操作，防止滴管、试剂的污染。
细核悬液的平铺要轻柔；
浓酸的取用要小心；
使用离心机注意平衡，转速从低到高；
思 考
1. 本实验结束后若想继续测定肝脏中DNA、RNA的含 量，可用什么方法？
2. 我们已经学习了电泳法和层析法来分离蛋白质，请问 我们是否可以用这两种方法分离DNA、RNA？若能，请简单叙述其原理。
实验七 　血糖测定（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶　 　　法）及肾上腺素对血糖浓度的影响
？
？
、低血糖，尿糖？
。
下次实验预习内容
生物化学设计性实验安排
经讨论决定，本学期第八次实验是设计性实验，也作为实验考核内容，占实验总成绩的30%（共9分）。
：牛血清白蛋白的提取与鉴定
：
要求每大组1份，写明实验目的、实验原理、操作步骤或流程、仪器和试剂、预测结果、参考文献或资料等项目。于第七次试验前完成，第七次实验时交给相应实验室的实验教师。
实验设计成绩4分（科学合理3分、可操作性1分）
：按最后一次实验的时间安排，分班按课程表进行实验，要求每人独立完成实验操作并当堂完成实验报告。
实验操作成绩3分（基本操作1分、试剂盘整理有序1分、实验环境卫生1分）
实验报告成绩2分（目的原理分、操作流程分、结果分、分析讨论分）
生物化学实验室
2010年11月15日
实验六
网织红细胞计数
血小板计数
要求
熟悉网织红细胞染色的原理及形态学特点，掌握计数方法，了解注意事项和临床应用。
学会镜下辨认血小板的形态，掌握血小板计数的方法和参考值，了解注意事项及临床应用。
红系祖细胞
原红
早幼红
中幼红
晚幼红
网织红
红细胞
一、网织红细胞计数
骨髓
外周血
网织红细胞（reticulocyte, Ret）