高效液相色谱法(9).ppt

第十章高效液相色谱法
第一节 固定相和流动相第二节 高效液相色谱仪第三节 液-固色谱法第四节 化学键合相色谱法第五节 离子交换色谱法第六节 尺寸排阻色谱法第七节 分离方式的选择及应用
high performance li粒很细（5～10m），
孔较浅，传质速率快，易实现高效、高
速。特别适合复杂混合物分离及痕量分
析。
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表10-1 两类固定相的性能比较
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二、流动相
对流动相的要求是：
1. 纯度高
由于高效液相色谱灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要
求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。
2. 粘度低
若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常用
的低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等；但粘度过低的溶剂也
不宜采用，例如戊烷和乙醚等，它们容易在色谱柱或检测器
内形成气泡，影响分离。
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3. 化学稳定性好不能选与样品发生反应或聚合的溶剂
4. 溶剂沸点要高于55℃
低沸点溶剂挥发度大，容易使流动相浓度或组成
发生变化，也容易产生气泡
5. 溶剂要能完全浸润固定相
溶剂对所测定的组分要有合适的极性，最好选择
样品的溶剂作流动相，否则发生溶剂与流动相不相
混溶的情况，使分离变坏
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6. 溶剂与检测器匹配

对于紫外吸收检测器，所选择的溶剂在检
测器的工作波长下不能有紫外吸收。

对于折光率检测器，要求选择与组分折光
率有较大差别的溶剂作流动相，以达到最高
灵敏度。
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第二节 高效液相色谱仪 high performance liquid chromatograph
一、液相色谱仪器
二、流程及主要部件
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一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph
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液相色谱仪（2）
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液相色谱仪（3）
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液相色谱仪（4）
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二、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC

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高效液相色谱仪流程图
1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）
2．高压泵（输液泵）
3．进样装置
4．色谱柱——分离
5．检测器——分析
6．废液出口或组分收集器
7．记录装置
图10-1 高效液相色谱仪结构方块图
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2. 主要部件
高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成。
分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。
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（1）高压输液系统
溶剂贮存器
高压泵
梯度洗脱装置
压力表
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A. 溶剂贮存器
溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。
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B. 高压输液泵
高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。由于液相色谱仪所用色谱柱径较细，所填固定相粒度很小，因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过色谱柱，就需要高压泵注入流动相。
对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流量恒定、无脉动，%左右。此外，还应耐腐蚀，密封性好。
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续前
高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒
流泵两大类。
恒流泵是能给出恒定流量的泵，其流量与
流动相粘度和柱渗透无关。
恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随
外界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生
变化，恒压泵就能提供恒定的流量。
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C. 梯度洗脱装置
梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。

梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动