takara反转录试剂盒说明书.pdf

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研究用
PrimeScript™RTreagentKit

研究用
PrimeScript™RTreagentKit
withgDNAEraser
(PerfectRealTime)
说明书
v201512Da目录
内容页码
●制品说明1
●制品内容1
●试剂盒外必备材料1
●保存1
●特长2
●使用注意2
●操作方法2
●RealTimePCR4
●实验例6
●附录7
●关联产品8●制品说明
为了准确地进行基因表达量分析,必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件,但TotalRNA中常常
混有基因组DNA,并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增,因此会造成解析结果不准确。为了避免这
种情况发生,通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上,使基因组DNA得不到扩增。但是,此方
法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因,同时当基因组上有伪基因存
在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本
方法。在这种情况下,我们常常需要对TotalRNA样品进行DNaseI处理,以除去残存的基因组DNA。
而DNaseI处理通常要进行复杂的纯化操作,同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser是可以除去基因组DNA进行RealTimeRT-PCR反
应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNAEraser,通过42℃,2min即可除
去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分,经过gDNAEraser处理后的
样品可以直接进行15min的反转录反应合成cDNA,因此,20min内即可迅速完成从基因组DNA去除
到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于SYBR®Green分析法和TaqMan®探针分析法,可以根据实验目的,选择
PremixExTaq
与SYBR™II(TliRNaseHPlus)()、ProbeqPCRMix(Code
)组合使用。
注意:TakaraBio使用SYBR®。
SYBR®。
●制品内容(20μl反应×100次)

×gDNAEraserBuffer*1200μl
*2100μl
×PrimeScriptBuffer2(forRealTime)*3400μl
*4

×2
(forRealTimePCR)*51ml
*1:5×gDNAEraserBuffer在反转录反应前使用,请务必进行基因组DNA的除去反应。
*2:含有RNaseInhibitor。
*3:含有dNTPMixture。
*4:含有OligodTPrimer和Random6mers。
*5:制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或RNA如果用水或TE
Buffer稀释时,由于受Microtube吸附作用等的影响,往往不能准确地进行稀释,导致实验结果精
度降低。使用本制品时,即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释,容易在宽广范围内获得准确定
量的标准曲线。本制品不影响反转录和PCR反应,用其稀释后的样品可直接使用。EASYDilution
(forRealTimePCR)()也可以单独购买。
注意:EASYDilution(forRealTimePCR)请与本公司RealTimePCR试剂组合使用,对于
其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。
●试剂盒外必备材料
热循环仪(或37℃水浴,42℃水浴和85℃加热块)

微量移液器和枪头(高压灭菌)
●保存:-20℃。
-1-●特长
,只需2min即可除去基因组DNA。
,是进行2StepRe