位点特异性重组系统在甘蓝型油菜中的建立.pdf

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学位论文作者:王绍辉月日期:年口多月冢荷峡冢,/原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。.
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摘要位点特异性重组技术是通过特异性重组酶对囟ㄐ蛄薪凶既非懈詈重新连接,从而在基因或染色体水平上对生物进行遗传改造的一种技术。位点特异性重组系统在转基因植物基因的定点整合、基因删除、多基因植物表达载体建立、多基因叠加、遗传育种等方面都有十分重要的意义。本实验选用痩虵/礁鑫坏闾匾煨灾刈橄低常訥躺荧光蛋白1ǜ婊虺晒菇肆礁霰泶镌靥錤隒,用于在甘蓝型油菜中建立痩癋/礁鑫坏闾匾煨灾刈橄低场T谧;虺擅缡笛楣程中,采用农杆菌浸染法转化植株,摸索了卡纳霉素抗性筛选的最佳浓度,以下胚轴和子叶柄为外植体的再生体系经过共培培养、延迟培养、筛选培养及生根培养等植物组织培养过程成功转化了棵载体阳性苗和肅载体阳性苗。本实验还就实验过程中由于一些染菌和移栽失败,造成一些阳性苗濒临灭绝的问题摸索了一整套以叶片为外植体再生成苗的体系。并应用在了稀缺苗上,成功得到了大量再生苗,解决了此项问题。后期成苗检测研究过程中,用普通椒ㄔ谟筒嘶蜃橹屑觳獾娇煽剐基因,初步判断为转基因植株。通过以富蛭L秸虢蠵杂交分析,分析结果显示有明显的预期信号出现,进一步表明表达载体已经整合到油菜染色体中。通过半定量法在缴霞觳獾搅薈基因的表达,并得出了每个植株表达量的差异。这不仅证实了位点特异性重组系统成功的在甘蓝型油菜中表达,同时也为以后研究工作提供了有力依据。本实验成功在甘蓝型油菜中建立了痩隖/坏闾匾煨灾刈橄统,并进一步检测了阳性苗的表达情况,为在甘蓝型油菜中实现基因定点整合和多基因叠加等研究目标迈出了重要的一步。研究结果为后期实验提供了有力关键词:甘蓝型油菜植物转基因基因定点整合位点特异性重组系统依据。痩.
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目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..我国油菜产业发展现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯;;;蚍⒄;虬踩兰邸位点特煨灾刈橄低吃谥参镏械难芯拷埂位点特异性重组系统的定义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一试验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...靥骞菇ǚ椒ú呗浴靥寰咛骞菇ú⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..郊觳獗泶锪俊峁敕治觥位特异性晕组系统/:.蓝型油菜巾的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..““
目的基因导入甘篮型油菜结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯无菌苗获得结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.秆⊙∨.┓.⋯.........⋯.⋯⋯..⋯.⋯.⋯⋯.⋯...........⋯⋯.......⋯.⋯.........⋯.....⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯...⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯......⋯⋯............⋯⋯⋯⋯..⋯....⋯⋯⋯⋯.⋯⋯....⋯..................⋯⋯..⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯