猪弓形虫抗体检测试剂盒.docx

该【猪弓形虫抗体检测试剂盒 】是由【fengruiling】上传分享，文档一共【6】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【猪弓形虫抗体检测试剂盒 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。仅供科研使用,不得用于临床检验。
猪弓形虫抗体定性检测试剂盒(ELISA)说明书
【产品名称】
通用名称:猪弓形虫抗体定性检测试剂盒(ELISA)
英文名称:TestKitforAntibodiestoPorcineToxoplasmaGondiiELISAKIT
【包装规格】
96人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用,弓形虫病是由刚第弓形虫(Toxoplasmagondii,T0X)引起的一种人畜共患寄生虫病,以发热、呼吸急促、嗜睡、后肢麻痹为主要特征。
本试剂盒用于检测猪血清或血浆中弓形虫抗体,可用于评估猪场弓形虫感染状况。
【检验原理】
本试剂盒系由预包被弓形虫Sag1重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中弓形虫抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有弓形虫抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有弓形虫抗体。
主要组成成分】
主要成分
组分
数量
主要成分
阴性对照

——
阳性对照

——
包被微孔板
96T
预包被固相抗体
HRP标记抗体
6mL
HRP标记的检测抗体
样本稀释液
25mL
——
底物液A
6mL
过氧化脲工作液
底物液B
6mL
TMB工作液
终止液
6ml
2mol/L稀硫酸
20X浓缩洗涤液
30mL
%Tween20的PBS
说明书
1份
——
自封袋
1个
——
不干胶
2片
——
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、 精密移液器及一次性吸头
3、 蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、 37°C水浴锅或恒温箱
6、 500ml量筒
7、 无粉一次性乳胶手套
【储存条件及有效期】
1、 2-8C保存,切勿冷冻,有效期6个月。
2、 开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回
2-8C冰箱。
3、 开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,
其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪,如ThermoMK3,或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、 细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在_20°C以下,避免反复冻融。
2、 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在-20C以下,避免反复冻融。
3、 血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20C以下,避免反复冻融。
样本保存和稳定性
样本在2-8C条件下,可以储存72h,或者在-20C储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。
【样品准备】
取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2〜8C保存,长期需置-20C保存。
2•用样品稀释液将待检血清按100倍稀释(如2pl血清加入198》l样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。【检验方法】
使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2〜8C保存。
3•空白对照孔加样品稀释液100》l;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100》l;样品孔每孔加入稀释后的样品100》l。
仅供科研使用,不得用于临床诊断。
4•混匀,置37°C反应30分钟。
,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6•每孔加酶标记物100》l(空白孔除外)。置37C反应30分钟。
7•洗涤,同步骤5。
8•每孔依次加底物液A、底物液B各50》1,混匀,37C避光反应10分钟。
9•每孔加终止液50》1,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A
值),无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
【参考值】实验正常的情况下,,阳性对照±。
【检验结果的解释】
(临界值)=();
2•样品值〉,。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清或血浆中弓形虫IgG抗体。
【保存条件】
2C-8C保存,有效期6个月。
【注意事项】
生物安全
1、 检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、 试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、 底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。
技术提示
1、 混合蛋白溶液时,避免起泡。
2、 加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。
3、 合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。
4、 底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。
5、 终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为
黄色。
6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。