斑马鱼缺氧诱导因子-3α的克隆、表达和功能研究.pdf

『▲■谨以此论文献给给予我关心帮助的师长、同学、亲人和朋友张鹏
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涨加学位论文作者签名:多次签字日期:乃『,一斟独创声学位论文版权使用授权书明翅遗直基丝重墓挂型直明的:奎拦亘窒蚱渌逃沟难换蛑な槭学本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,并同意以下⒀S腥ūA舨⑾蚬矣泄夭棵呕蚧顾徒宦畚牡母从〖痛排蹋市⒀?梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄厥菘饨屑焖鳎梢采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊馀贪电子杂志社”用于出版和编入《中国知识资源总库》,授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签字:巨确的说明并表示谢意。事项:论文被查阅和借阅。者年舱文位期字整
斑马鱼缺氧诱导因子目寺⒈泶锖凸δ苎芯摘要缺氧在胚胎发育、生理和病理反应中起着重要作用。机体和细胞为应对缺氧胁迫,形成了大量蛋白参与的,精巧、复杂的反应机制。在整个应答体系中,.,..,对粗V跎佟1狙芯靠寺〉玫桨呗碛鉮ü迥凇⑻逋馐笛椋状证实是转录因子,同时发现一个不受氧气调控的转录本并研究它的活性位点和体内功能。本研究从模式生物斑马鱼中克隆得到基因,它位于号染色体,相比,含有吮J亟峁褂和和氧应答结构域失薈—峁褂颍略鯨峁褂颉0呗碛鉮氏秩硇员泶锬J剑J加忻飨员泶铮婧笾鸾ド卟⑽衷谖定水平;在成鱼肾脏和卵巢中表达最高,脑、鳃、脾脏、心脏、肠胃和精巢都有明显表达。转录水平,的表达受氧气浓度调控,成鱼或胚胎经过缺氧处理后,显著升高。翻译水平,也受氧气调控,结构域中两个保守脯氨酸基序介导了常氧条件下的降解,点突变该基序核心氨基酸后,斑马鱼的蛋白水平和活性都显著提高。亚细胞定位显示是核蛋白,说明具有作为转录因子的特征。本研究从体外和体内两个层面,证明是转录因子。首先,利用荧光素酶报告体系,。向胚胎显微注射氧诱导因子亲罟丶牡骺卣撸佑诤诵奈恢谩家族包括,全长,,含个外显子,,从共转染,则抑制报告基因的表达,这说明,能显著上中国海洋大学博士学位论文
调报告基因,同时发现,内源基因和的表达水平也明显上升;将与共注射胚胎,则检测不到猯蛂谋浠蛔⑸能抑制缺氧对猯蛂纳系髯饔茫徽獗砻鱄芄蛔魑转录因子调节内源基因的表达,是转录因子。此外,实验显示具有独立的转录活性,且不影响活性。,含鐾庀宰樱嗦个氨基酸,包括蚅礁鼋峁褂颍谑空表达模式上与类似。狿检测发现,缺氧处理成鱼和胚胎,不影响—的表达;ù嬖冢砻鱄的和蛋白都不受氧气调控。无论在细胞系还是活体胚胎细胞,.级ㄎ辉谙胞核中。体外转染不同细胞系,.艽俳ǜ婊虮泶铮慌咛プ⑸銱显著增强内源基因/.的表达,ü除突变证实,;首次发现不受氧气调控的產蛋白.—U庑┙峁I钊胙芯縃墓δ艿於ɑ。匀嫒鲜和理解產家族具有重要价值。关键词:缺氧;缺氧诱导因子一;转录因子;基因表达;斑马鱼中国海洋大学博士学位论文
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