PCR净化实验室整体规划.docx

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PCR净化实验室设计整体计划
1PCR实验室平面布局
PCR扩增试验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反映混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必需严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反映混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
2实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并且没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。

该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反映混合液的制备。试剂和用于样本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必需贮存在本区内,并且在本区内制备成所需的贮存试剂。
关于与气流压力的控制,本区并且没有严格的要求。
该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、NA)提取、贮存及其加入至扩增反映管和测定NA的合成。
本区的压力梯度要求为:相关于于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
扩增反映混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为NA扩增。此外,已制备的NA模板(来自样本制备区)的加入和主反映混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反映混合液等也可在本区内进行。
本区的压力梯度要求为:相关于于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽快减少在本区内的不必要的走动。各别操作如加样等应在超净台内进行。
扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。
本区是最主要的扩增产物污染来源,因此关于本区的压力梯度的要求为:相关于于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
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3污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组NA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必需停滞,直到找到污染源为止,而且实验结果必需作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。
工作区域的严格划分
各个实验区域设置合理;
各个实验区域要有鲜明的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
合理的系统设置
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合理的空调通风系统设置,尽快采用全送全排的空调系统;
严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。
扩增试验实验室的技术人员必需进行上岗培训,经培训合格后才能从事临床基因扩增试验的工作;
在实验操作进程中,操作者必需戴手套,并且经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施;
清洁工作即时、正确。实验工作结束后,必需立即关于本区进行清洁。除常规的消毒液体关于表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,关于一些实验设备还应进行高压消毒处理。
严格的管理
严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独力的通道和进出整个实验区的门;
尽快减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必需经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等;
扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。
完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验
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室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。
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