格尔德霉素对DAPK的调节在脑缺血再灌注中的保护作用机制探究.pdf

徐州医学院
硕士学位论文
格尔德霉素对DAPK的调节在脑缺血再灌注中的保护作用机制研
究
姓名:王金俏
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:张光毅;李冲
2012-04
格尔德霉素对的调节在脑缺血再灌注中的保护作用机制研究笙型垦堂堕堡主堂堡笙查中文摘要目的目前的研究结果表明,细胞内死亡相关蛋白激酶,牡鹘谥饕L逑衷诹礁霾愦危夯虻谋泶锖兔傅幕钚缘节。死亡信号引起的蛋白和抑癌蛋白募せ羁梢栽銮緿虻表达。的酶活性主要受磷酸化/去磷酸化的调节,但调节机制不止一种。的激活机制主要有/钙调素依赖的磷酸酶导致的坏乃堪彼崛チ酸化,胞外信号调节激酶贾碌位的丝氨酸磷酸化,以及酪氨酸蛋白激酶土姿崦调节的位酪氨酸的磷酸化等。在全脑和局灶脑缺血中发现,可以通过受体的过度激活,引起内流,激活钙调神经磷酸酶笵チ姿峄せ睢。可见,对于在不同生理条件下活性的调节是个复杂问题,需更进一步的研究。为此,我们研究了在脑缺血/再灌注中格尔德霉素对的调节作用。方法采用四动脉结扎法来构建大鼠全脑缺血模型,脑室注射法给药,脑室注射格尔德霉素,蛋白酶体抑制剂疭检测在脑缺血再灌注中表达量和磷酸化水平变化,用免疫沉淀检测脑室注射和驞虷、结合的表达和活性的变化情况。用焦油紫染色的方法检测脑缺血再灌注中的大鼠海马窬5拇婊詈偷蛲觥结果引起脑缺血再灌注∈盌泶锪康慕档停鹑毖8垂下降。我们实验得出能够引起—岷系慕档停珿芄灰和。运用小时磷酸化水平的升高。能够引起脑缺血再灌注中—合水平的降低,蛋白酶体抑制剂种屏薌鸬腄泶锼降
的表达降低,而种屏苏庵肿饔谩降低了脑缺血再灌注海马鳧谋泶锼剑籊ü制与南嗷ソ岷希餌牡鞍酌柑褰到猓籊档土四缺血再灌注中的激活;;对脑缺血再灌注造成的海马窬K鹕擞斜;ぷ饔谩关键词;;荒匀毖#籑;神经保护作用徐州医学院硕士学位论文结论
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缩略词表缩略词英文全称中文全称海马含半胱氨酸的天冬氨,琋,酸蛋白水解酶死亡相关蛋白激酶二甲基亚砜二硫苏糖醇乙二胺四乙酸钠產叶家凰一氨基乙显色液格尔德霉素辣根过氧化物酶免疫沉淀牛血清蛋白钙调蛋白死亡结构域基醚囊宜热休克蛋白缺血/
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死亡相关蛋白激酶,且焕喽嗷的钙调素调控的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它能够使其底物蛋白的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化,是一种调控细胞凋亡的正调控因子谙赴婊睢⒅瘤抑制、细胞运动性、细胞骨架组成性等方面都有很重要的作用。最初是作为由扇潘盏枷赴蛲龅囊恢终骺刈佣环掷爰ā分子量是珼喔龉δ芮个核心的催化区域,贰个细胞骨架结合区域和鏊劳鼋峁骨区域,。与肌球蛋白轻链激酶具有很高的序列相似性。研究发现,家族―珼—琙珼,包含雒芮邢喙氐乃浚源性【】。从晶体结构上看,的┒送黄鹦纬个环,并在特定的多肽连接区域形成一个帽状结构。此环在家族―,,珼等惺歉叨缺J氐模勺魑狣易宓囊桓指纹,并且这个环可能在底物磷酸化或激酶活性的调节中起重要作用⋯。研究发现,可通过两种方式调控其活性:一种是钙调区域的自身磷酸化的调节作用,磷酸化不仅调节酶的催化活性,也调节酶在体内的功能;另一种自身抑制机制与┒说霭被岵谢泄兀淙荒壳岸运疃姆子机制知之甚少,但它可能为特定药物的研发提供基础【在正常的生理条件下,位于/虻乃堪彼位自身磷酸化,从而抑制了的活性。这个点的磷酸化抑制了/慕岷希纬梢种负调控活性的机制,而去磷酸化则会解除这种抑制作用,并引发其促徐州医学院硕士学位论文鼋袅诘母频鞯鞍捉岷锨颍个由鲋馗吹拿6ǖ鞍鬃槌傻那颉个苏氨酸蛋白激酶,分别是,和,他们的催化区域具有高度的同月吾】。
凋亡活性。在缺血复灌中,受体被激活,内流增加,导致了钙调神经磷酸酶,的活化,而活化的钙调神经磷酸酶又将处于磷酸化状态的去磷酸化,从而导致的活化,引发细胞凋亡俊在缺血性脑中风中,大脑海马区神经元是损伤和死亡的最主要区域。年,等人报道缺氧损伤后的海马区在恢复期的活性明显增强【辏琕热吮ǖ纪ü种萍烈种艱幕钚悦飨钥以减弱缺氧引起的大脑损伤‘4送猓谛∈笊鲈嗳毖T俟嘧⒅蟹⑾郑境最重要的功能结构域。年拢报道和受体亚基的相互作用介导了脑中风神经元损伤‘K裕珼蝗衔H毖P运鹕说闹匾可能治疗靶点之一【。激活的可以磷酸化多种下游底物,通过多种方式引起细胞凋亡【А包括促进自噬小泡的形成、引起细胞骨架蛋白闹嘏拧⒓せ頲蛋白酶家族等,以及通过蛋白激酶せ頙信号通路等‘T谌毖P阅灾蟹缰校通过什么样的下游通路导致神经元的损伤和死亡目前尚不清楚,也需要进一步的研究。死亡相