DNA聚合酶X家族新成员—DNA聚合酶λ2功能的初步探究.pdf

後翌大学酆厦竂家族新成员’酆厦溉功能的初步研究博士学位论文遗传学院专姓生命科学院业:谷福指导教师:李育阳教授完成日期:年系:名:学校代码:学号:摘要关键词:酆厦竈鞍状炕珼聚合酶活性,酵母双杂交,肝肿瘤本研究发现并克隆了一个肝脏特异的人类酆厦富颍荘囊个剪接体,命名为。该基因的长,包含一个的开放阅读框,。生物信息学分析表明,鞍缀虳聚合酶易宄稍备叨韧矗⒑姓飧黾易逄赜薪峁褂騊虼耸且桓鯠聚合酶易宓男鲁稍薄8没蚝塑账嵝蛄泻拖嘤Φ鞍装被嵝蛄幸烟峤恢锹己盼狝亚细胞定位实验证实,鞍锥ㄎ挥谙赴耍涸谌肿橹斜泶锲实验表明,该基因在肝组织中特异性高表达,在其他组织中不表达或低表达:癌和癌旁表达差异实验表明;和『8巫橹桶┡宰橹啾龋谑霭┳橹难本中有%样本的的表达上调,导致蚉膍肿的比例异常,可能和肝癌的病理过程有关。大肠杆菌重组表达融合蛋白保ü晟秆。竦媚芨弑泶颬的宿主菌;通过优化条件,找到一种可以高效地使灞湮?扇蛋白的方法,对于其他蛋白表达时,减少包涵体蛋白的产生,增加可溶性,具有参考作用。纯化了鞍祝凰丌蛞籶掺入实验,证实了具有酆厦富钚裕辉谔剿鞔炕吮泶锏娜诤系鞍譖时,建立了一种新的高效纯化方法一脱氧核糖核酸酶纯化法,为研究岷系鞍椎拇炕供了新思路。以S斩鞍祝媒湍杆咏筛选了人胎肝和睾丸文库,获得了阳性克隆痗狪。复旦大学博:卜学位论文酆厦竂家族新成员一酆厦竈δ艿某醪窖芯狧●入蒩,复旦大学博:貉宦畚腄聚含酶易逍鲁稍聚合酶功能的初步研究瑆甌.,甌.—,...—●,.,复旦大学博士学位论文酆厦竂家族新成员一酆厦竈δ艿某醪窖芯珻/狫,琍,●和细胞质【浚築家族为甤抑伟富睿秆≈专一性抑制剂姜黄素阻∞恢挚孤愿日舌酆厦冈谙赴胁斡隓复制、修复和重组、以及细胞周期调控等过程,对维持基因组完整性起着必不可少的作用⋯。目前人们发现了真核生物的多种酆厦福菟堑陌被嵝蛄邢嗨性可分为四个家族:易逦狤酆厦窱及其同源物,如线粒体酆厦窱嗤次铮鏟【、蚉‘;易逦狤./【和真核生物的虮嗦氲薷吹木酆厦;易逦R訮为代表的酆厦竚酆厦竫家族是一个比较特殊的群体,主要由参与薷垂袒基因重排的酆厦缸槌桑ḿ棺刀颬贒修复中起重要作用;酵母,参与染色体非同源重组;裂殖酵母蛋白推测为的同源体:末端脱氧核苷转移酶茉谥刈榈腎蚑细胞受体基因片段的连接处添加核苷酸;非洲猪热病毒珹,是由最小的诵淖槌傻大小的酶【=创小鼠和人发现的两种新的酆厦福琍蚉脖还槿隤易濉啊埃其中参与特定的生理功能,逐渐被人们所重视。从小牛胸腺组织中分离纯化的,发现它能在含有无碱基位点点哪0迳虾铣蒁,而且合成效率和未损坏的嗤得鱌赡有跨越损伤铣傻墓δ堋薄啊T诘团ǘ萪榭鱿拢琍萈钚愿很多⋯芎驮鲋诚赴丝乖琍直接作用,这种作用能够稳定和引物模板的结合,促进铣桑⑻岣跨越无碱基位点合成的效率,参与复制和长补丁碱基修复“”。是一个铣傻捅U娑鹊腄聚合酶,与在其他一些真核生物中的酆厦溉纭薄、蚢相比琍圆坡胪槐淦德首罡呶L卣鳎为染药和抗突变防癌药珼5玃笔б蚕赴岵嗤槐洌在酵母的同源基因的缺失突变体,可以生存的,但出现高频重组.,同型交配酝槐淦隝敏感度降低,存活率升高;基因敲除的小鼠,第一代可以存活,其体细胞会出现高频突变,引起遗传不稳定,增加肿瘤的易感性”。最近研究发现,具有末端脱氧核苷酸转移酶钚裕驪谎复旦大学博士学位论文酆竂家族新成员一酆厦竈δ艿某醪窖芯●部梢蕴畈共⒉斡敕峭粗冂矍摇尽铣蒁方式有两种偏爱在模板的洗呋蜒踵奏ず塑账嶙R啤T谟蠱狈从μ跫蟪Ρ泶的重组蛋白没有检测到钚裕蠱钡姆从μ跫拢琍刈榈鞍检测到钚裕有∨P叵偬崛〉奶烊籔鞍譓”下都有性,在真核细胞中蛋白可能存在翻译后修饰【哂刑睿簘┒说部分互补双链的功能【浚梢圆斡肜糜胁糠执砼涞囊锬0褰蠨的合成,从而参与了姆峭碊重组,修复双链断裂的T诜峭碊重组过程中,端裂的乃茨┒丝梢酝嘶穑纬刹糠峙涠缘乃唇峁梗渖厦有小的缺口,是“连续的”还是“散布式”饬絵合成方式如何协调,在什么情况下进行哪种方式合成,有待进一步研究。由于参与长补丁碱基修复和非同源刈椋銬合成的低保真度而容易产生突变等重要生理活动,因而的功能特性研究成为当前生物学热点之一。有关文献的的实验结果表明【保诟巫橹峡恚崾究赡艽嬖谝桓龀ざ壬喜畋鸩淮蟮钠渌鸓淖B急净蚣艚体。进一步用的衕,发现大部闹氐菏荘硗庖恍〆则提示可能存在一个新转录本或剪接体。因此,在本实验中针对进行—寺〉搅艘桓鯬虻男耬蛄校狿,其序列递交网上数据库,得到云浣行了组织表达谱、亚细胞定位的研究;为了进一步明确纳锕δ埽大肠杆菌系统中表达纯化了人重组鞍祝猛凰夭羧敕ḿ觳饬似銬聚合酶活性;同时,利用酵母双杂交筛选了嗷プ饔玫牡鞍住复旦大学博:宦畚腄聚合酶易逍鲁稍聚台酶功能的初步研究●露搿娥::知管猦弧躲翌盘怒臻麟篇器“⋯塑大学博二螋论享酆厦竂家族新成员一酆厦竫材料和方法“⋯