四、血浆凝固酶试验
【目的原理】
血浆凝固酶
定义:是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔的血浆发生凝固的酶类物质。致病性葡萄球菌大多能产生凝固酶,非致病葡萄球菌不产生此酶。
作用:是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。
分类
游离型凝固酶
分泌至细菌体外
被血浆中凝固酶反应因子激活,形成葡萄球菌凝血酶
使纤维蛋白原变为纤维蛋白,导致血浆凝固
采用试管法检测
结合型凝固酶
在菌体表面
与纤维蛋白原结合,使纤维蛋白原变为纤维蛋白
引起细菌凝集
采用玻片法检测
纤维蛋白原受体
(结合凝固酶)
致病菌
纤维蛋白原
【材料】
菌种:金黄色葡萄球菌(SA)
表皮葡萄球菌(SE)
兔血浆、生理盐水(备用)
玻片
【方法】
标记玻片:在玻片背面用标记笔划两个圆形区域,并标上预取菌的菌名
取兔血浆:用灭菌接种环分别取兔血浆3-4环于两个标记区域中
取菌混悬:用灭菌接种环取少量表皮葡萄球菌与兔血浆混匀,以同样的方法取金黄色葡萄球菌与另一侧兔血浆混匀
结果观察
【结果判读】
如出现颗粒状凝集现象即为血浆凝固酶实验阳性。如不立即发生凝集,可轻摇玻片加速反应,若仍无凝集则为阴性。
【注意事项】
实验前可用生理盐水检测两种细菌有无自凝现象,以防假阳性结果的出现
取兔血浆和两种细菌时都要将接种环灼烧灭菌并待其冷却
实验结果应即使判读,放置时间过久会导致假阳性的出现
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