大蒜中提取SOD提取.doc

大蒜中提取SOD提取
本科生课程论文封面
课程名称现代生化技术
授课学期学年至学年
第
学院漓江学院
专业生物技术
组员李翠200913007007
任课教师刘晓灿老师
交稿日期 2010年10月
成绩
阅读教师签名日期
广西师范大学
大蒜细胞SOD的提取与分离
【摘要】 SOD(超氧化物歧化酶)是一种源于生命体的活性物质,能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶(SOD)。它可催化超氧负离子进行歧化反应,生成氧和过氧化氢:。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD,通过组织或细胞破碎后,。由于SOD不溶于丙酮,可用丙酮将其沉淀析出。然后根据SOD抑制肾上腺素自氧化的效率,可间
接测出SOD酶的活力。
【关键词】:超氧化物歧化酶歧化反应酶活力
【引言】超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, , SOD)是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起,人们对SOD的研究己有七十多年的历史。ord等重新发现这种蛋白,并且发现了它们的生物活性,弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质,所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。
超氧化物歧化酶广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属酶类。它作为生物体内重要的自由基清除剂,可以清除体内多余的超阴离子,在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。离子(O2)是人体氧代谢产物,它在体内过多积累会引起炎症、肿瘤、色斑沉淀、衰老等疾病,超氧阴离子与生物体内许多疾病的发生和形成有关。由于SOD能专一消除超氧阴离子而起到保护细胞的作用,SOD作为一种药用酶,具有广阔的应用前景,并引起了国内外医药界、生物界和食品界的极大关注。
【正文】
本实验使用的是大蒜细胞中的超氧化物酶,利用SOD不溶于丙酮,可用丙酮将大蒜中的SOD析出。
实验材料和试剂
(1)新鲜蒜瓣,市售
(2)大蒜细胞,通过细胞培养技术获得
(3)磷酸缓冲液:
(4)氯仿-乙醇混合溶剂:氯仿:无水乙醇=3:5(V/V)
(5)丙酮:用前冷却至4-10°
碳酸盐缓冲溶液:,
EDTA溶液:
肾上腺素夜:2mol/L
实验设备
研钵、试管、试管架、烧杯、滴管、移液管、吸耳球、数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)、可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)、离心机(上海安亭科学仪器厂)
操作方法

称取5克左右大蒜蒜瓣或大蒜细胞,置于研磨器中研磨,使组织或细胞破碎。

将上述破碎的组织或细胞,加入2- mol/L ,,继续 2
研磨搅拌20分钟,使SOD充分溶解到缓冲液中,然后用离心机在5000 r / min ,离心15 min,弃沉淀,得提取液。

—乙醇混合溶剂搅拌15分钟,5000r / min 离心15 min ,去