大鼠基质金属蛋白酶2试剂盒说明书.doc

大鼠基质金属蛋白酶2试剂盒说明书
大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆,
上清及相关液体样本中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平。用纯大鼠基质金属蛋白酶2(MMP-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔次加入基质金属蛋白酶2(MMP-2),再与HRP标记的MMP-2抗体结合,形成抗体- 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶2(MMP 正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人基质金属蛋白酶2(MMP-2)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成48孔配置96孔配置保
说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保
标准品:450μg/××1瓶2-8℃保
××1瓶2-8℃保
酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保
样本处理及要求:
:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后, 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该离心。
:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-30 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(-)稀释细胞悬液, 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤: