山冈橐吾碱对HEK293 细胞谷胱甘肽含量及相关酶活力的影响.pdf

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毒理学杂志 2007 年 6 月第 21 卷第 3 期 J Toxicol June 2007 Vol 21 No 3 · 502 ·
中图分类号:R994 6 文献标识码:A 文章编号:1002 - 3127(2007) 03 - 0205 - 03 ·实验研究·
山冈橐吾碱对 HEK293 细胞谷胱甘肽含量及相关酶活力的影响
季莉莉1 ,陈莹1 ,2 ,王峥涛1 ,2
(1. 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室,上海 201203 ; 2. 中国药科大学生药研究室)
关键词:吡咯里西啶生物碱;山冈橐吾碱(clivorine) ;谷胱甘肽( GSH) ;谷胱甘肽硫转移酶( GST) ;谷胱甘肽还原酶( GR)
吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids , PAs) 是胞贴壁生长状态良好时加入 clivorine (100μmol L) 作用
一类天然的植物性毒素,广泛存在于6 000多种高等植 48 h ,或加入不同浓度的 clivorine 作用 48 h ,严格按照
物中[1] 。山冈橐吾碱(clivorine) 是从菊科橐吾属药用试剂盒说明书中的方法收下细胞、测定 GSH、GSSG 含
植物鹿蹄橐吾( Ligularia hodgsonii ) 中分离得到的量,并计算 GSH GSSG的比值。
otonecine 型吡咯里西啶生物碱,橐吾属部分药用植物 1 4 GST 酶活力测定 HEK293 细胞按 3 × 106 个每盘
的根及根茎在民间习称为山紫菀或川紫菀,常用来代铺入 100 mm 培养皿中,12 h 后待细胞贴壁生长状态良
替紫菀(Radix Asteris) ,治疗咳嗽、肝炎和其他炎症,并好时加入 clivorine (100μmol L) 作用 48 h ,然后将细胞
收入四川,云南等省的地方标准。我们前期的研究已裂解于冰冷的细胞裂解液中(含蛋白酶抑制剂) 液氮和
对 clivorine 的肝细胞毒性及其机制进行了初步的探 37 ℃反复冻融 2 次,10 000 r min ,4 ℃,离心 10 min ,取
讨[2 4] ,同时我们已经发现 clivorine 对人胚肾 HEK293 上清,以小牛血清白蛋白(BSA) 为标准用考马斯亮蓝
细胞有明显的毒性[3] ,然而其毒性机制并不十分明确。法测定蛋白浓度,按试剂盒方法测定并计算 GST 酶
谷胱甘肽( GSH) 被认为是细胞内最重要的抗氧化剂, 活力。
本实验主要观察 clivorine 对 HEK293 细胞内 GSH、氧化 1 5 GR 酶活力测定 GR 酶活力测定采用 Carlberg
[5]
型谷胱甘肽( GSSG) 含量及其 GSH GSSG 比值的影响, 和 Mannervik 改良的还原型辅酶(NADPH) 法。将正
对 GSH 相关的谷胱甘肽 S 转移酶( GST) 和谷胱甘肽还常细胞和 clivorine 孵育 48 h 后的细胞溶于