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氯霉素ELISA检测试剂盒说明书
氯霉素(Chloramphenicol)ELISA检测试剂盒说明书
一、概要
氯霉素(chloramphenicol, CAP)是应用广泛的抗菌素,曾对畜禽疾病控制和治疗起到了重要作用。但由于氯霉素存在严重的副作用,能引起人的再生障碍性贫血,粒细胞缺乏症等疾病,欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品,能最大限度地减少操作误差和工作强度。。二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被偶联抗原,样本中残留的氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯霉素抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中氯霉素的含量。三、适用范围
可定性、定量检测动物组织(肌肉、肝脏等)、尿液、血清、肠衣、牛奶、奶粉等样本中氯霉素的残留量。四、交叉反应率
氯霉素……………………………………100%; 琥珀氯霉素…………………………………92%; 氯霉素-葡萄糖苷酸………………………57%。五、使用单位需自备的设备及试剂设备:
┅┅微孔板酶标仪
450nm/630nm
┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置┅┅均质器┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平:感量

┅┅刻度移液管:10ml ┅┅洗耳球
┅┅容量瓶:100ml、500ml ┅┅玻璃试管:10ml
┅┅聚苯乙烯离心管:10ml、15ml、50ml
┅┅微量移液器:单道
20μl~200μl、100μl~1000μl
多道 250μl
试剂:
┅┅乙酸乙酯(分析纯) ┅┅乙腈(分析纯) ┅┅正己烷(分析纯)
┅┅二水合亚硝基铁氰化钠(分析纯)(供奶样用)
┅┅七水合硫酸锌(分析纯)(供奶样用) ┅┅葡萄糖苷酸酶
(Merck,)(供尿样本用)
┅┅醋酸钠(分析纯)(供尿样本用) ┅┅肝素钠(分析纯)(供血样本用) ┅┅醋酸(分析纯)(供尿样本用)
----去离子水
六、提供的材料与试剂
1、96孔酶标板×1块(包被有偶联抗原) 2、标准液×6瓶:(
2ml/瓶)
0ppb,,,,, 3、高浓度标准品:(2ml/瓶) 100ppb
4、酶标二抗………………………… 7ml 5、抗体工作液…………………………7ml 6、底物液 A液………………………… 7ml 7、底物液 B液…………………………… 7ml 8、终止液……………………………7ml 9、20×浓缩洗涤液………………………40ml 10、2×浓缩复溶液………………50ml 七、溶液的配制
配液1: C液(供奶样专用)
二水合亚硝基铁氰化钠()5·NO·2H2O)溶液
。
配液2: D液(供奶样专用)
1M七水合硫酸锌(ZnSO4·7H2O)溶液

100ml 。
配液3: 100mM醋酸钠溶液(供尿样本用) 称取 , 醋酸,再加去
离子水溶解定容至500ml
配液4:乙腈-水溶液
量取84ml无水乙腈加入到16ml去离子水中
混匀
配液5: 复溶工作液
用去离子水将2×浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释(1份2×浓缩复溶液+1份去离子水)用于提取样本的复溶,复溶工作液在4℃环境可保存一个月。
配液6: 洗涤工作液
用去离子水将20×浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释(1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水)用于酶标板的洗涤,洗涤工作液在4℃环境
可保存一个月。
八、样本前处理步骤样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂
时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否洁净,必须使
用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。(c)处理样本的同时,做空白试剂对照,样本的测
定结果减去空白试剂的测定结果为样本中氯霉素的实际残留量。
组织样本空白对照试剂的制备
┅┅取4ml乙酸乙酯在氮气流下完全干燥; ┅┅用
1ml正己烷充分溶解;
┅┅加入
1ml复溶液工作液(见配液5),强烈振
荡1min,静置分层后去除上层正己烷相;
┅┅取
100μl水相用于分析。
(d)未处理