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·204· 中华消化外科杂志 2009年 6月第 8卷第 3期 ChinJDigSurg,June2009,,
·论著·
端粒酶在大鼠肝卵圆细胞中表达的意义
张伟陈孝平项帅张峰董汉华张磊陈琳张万广
【摘要】目的检测大鼠肝卵圆细胞端粒酶活性,探讨端粒酶表达与卵圆细胞增殖分化的关系。方法
采用 2AAF/PH模型诱导大鼠卵圆细胞增殖,改良的胶原酶灌注结合密度梯度离心法分离,用细胞免疫荧光
和电镜鉴定卵圆细胞。采用免疫组织化学、RTPCR、荧光定量 PCR等方法检测卵圆细胞端粒酶的表达,组间
比较采用 t检验分析其意义。结果采用 2AAF/PH模型成功诱导大鼠卵圆细胞增殖。分离的卵圆细胞核
大,卵圆形,胞质少,呈铺路石样生长。电镜发现细胞核质比大,胞质内细胞器少且发育不成熟。细胞免疫荧
光结果表达 OV6、AFP、CK19、albumin、ckit。端粒酶逆转录酶(TERT)表达在门静脉周围增殖的卵圆细胞核
内,随着卵圆细胞逐渐向肝细胞方向分化,TERT阳性细胞数逐渐减少。大鼠正常肝组织 TERTmRNA表达水
平最高,为 LE6卵圆细胞的 ;分离的卵圆细胞 TERTmRNA表达水平为 LE6卵圆细胞的 ;采
用 2μg和 4μg细胞提取物分析细胞的端粒酶活性,随着 LE6卵圆细胞传代次数的增加,由 24代传至40代,
端粒酶活性由ΔA=、=、(t=,,P<)。结论卵圆细胞具有端
粒酶活性,端粒酶可能是卵圆细胞维持其增殖能力和多分化潜能的一个必要条件。
【关键词】卵圆细胞; 端粒酶; 细胞分离; 鉴定
Expressionanditssignificanceoftelomeraseinrathepaticovalcells ZHANGWei,CHENXiaoping,XIANG
Shuai,ZHANGFeng,DONGHanhua,ZHANGLei,CHENLin,ZHANGWan,
TongjiHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,China
Correspondingauthor:CHENXiaoping,Email:chenxp@
【Abstract】 Objective Todetectthetelomeraseactivityinrathepaticovalcells,andtoexplorethe
The
2acetamidofluorene/partialhepatectomy(2AAF/PH)ratmodelwasusedtoinducetheproliferationofovalcells.
Ovalcellswereisolatedbymodifiedcollagenaseperfu