视网膜下液基质金属蛋白酶双向电泳分离酶谱鉴定分析.pdf

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视网膜下液基质金属蛋白酶双向电泳分离酶谱鉴定分析
刘健平!" 陈百华$ 陈国华! 陈本美!
(! 中南大学湘雅医学院现代分析测试中心,长沙 4!%%87)
($ 中南大学湘雅附二医院眼科,长沙 4!%%!!)
摘要以增生性玻璃体视网膜病变患者视网膜下液为研究对象,结合单向明胶酶谱法和双向电泳分离技术创建
了基质金属蛋白酶双向电泳分离酶谱鉴定技术,该技术具有很高的分辨率和灵敏度,重复性好,能够提供蛋白质的
相关修饰信息。通过该技术初步发现在增生性玻璃体视网膜病变患者的视网膜下液中存在有 4 种基质金属蛋白
酶,其中$ 种是由& 或 4 种分子量相同但等电点不同的同分异构体蛋白质组成。
关键词增生性玻璃体视网膜病变,视网膜下液,基质金属蛋白酶, 梯度,双向电泳
中图分类号 D#3&&,E88 文献标识码 F 文章编号!%%%3&%5(! $%%&)%#3%5!&3%#
在增生性玻璃体视网膜病变( G2()=H-2:/=I- ^ !% X ZGR 预制干胶条、.C & ^ !% X ZGR 缓冲液和等
I=/2(/=?(.:/>J,G’E)中由于眼内细胞移行、增生和转电聚焦覆盖液购自 F0-2M>:0 G>:20:B=: V=(/-B> 公
化在视网膜前面、后面及玻璃体内形成一层增生的司,丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、尿素购自 F02-MB(
细胞膜,其过程牵涉到胶原酶(K()):L-?:M-)对细胞外公司,U66(二硫苏糖醇)购自 G2(L-0: 公司,KCFG,
基质(<;/2: B-))N):2 0:/2=;,<KO)中胶原(K()):L-?)的(&[3 &3B>():0=Q(.2(.J)]3 Q=0-/>J):00(?=(3!(.:?-MN)3
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降解和重塑! P & ,因此对 G’E 患者视网膜下液中 H-?:/-)、62=/(? [3!%%、62=M 碱、明胶、甘氨酸购自,=L0:
(,N12-/=?:) H)N=Q,,E9)聚集的基质金属蛋白酶公司,其它试剂都为国产分析纯试剂。样品来源于
(O:/2=; 0-/:))(.2(/-=?:M-M,OOGM)种类和含量进行分湘雅附二医院眼科,G’E 患者巩膜外放液手术中采
析有助于全面地了解病理发展过程。我们根据单向集约%]# 0X ,E9,用红细胞计数器计数,选用每微升
明胶酶谱法(R-):/=? SJ0(L2:.>J)的基本原理结合双,E9 中红细胞个数小于 4 的样品,共" 例,其中 G’E
向电泳分离技术(6T(3Q=0-?M=(?:) -)-B/2(.>(2-M=M,$3 F 级$ 例、K! 级$ 例、K$ 级$ 例、K& 级$ 例、未知级
U<)创建了一种新型的双向电泳分离酶谱鉴定技别! 例。
术,为 OOGM 研究提供了新方法,也初步展现了蛋白!"!"$ 溶液配方:
质组学(G2(