肉桂酸-4-羟基化酶检测试剂盒(肉桂酸比色法).doc

肉桂酸-4-羟基化酶检测试剂盒(肉桂酸比色法)
北京雷根生物技术有限公司
肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)检测试剂盒(肉桂酸比色法) 简介:
肉桂酸-4-羟基化酶是催化桂皮酸形成咖啡酸、香豆酸的酶。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质,属于细胞木质素合成途径中间的关键酶,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
Leagene肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)检测试剂盒(肉桂酸比色法)检测原理是以肉桂酸作为底物,在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法,于分光光度计或酶标仪290nm处检测吸光度,以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的肉桂酸-4-羟基化酶活性,尤其适用于检测水果中肉桂酸-4-羟基化酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
自备材料:
1、蒸馏水
2、研钵或匀浆器
3、离心管或试管
4、低温离心机
5、水浴锅或恒温箱
6、比色杯或酶标板
7、分光光度计或酶标仪
操作步骤(仅供参考):
1、准备样品:
北京雷根生物技术有限公司
①植物样品:取植物组织或水果中层果肉,加入C4H Lysis buffer,冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆,离心,留取上清液,冻存,用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,冻存,用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,离心,取上清液,冻存,用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
④高活性样品:如果样品中含有较高活性的肉桂酸-4-羟基化酶,可以使用蒸馏水或C4H Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。
2、配制NADPH工作液:取NADPH加入蒸馏水,充分溶解,即为NADPH工作液。该
NADPH工作液保存2周,-20℃保存3个月。
3、加样:按照下表设置对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。
如果样品中的C4H活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置2平行管,求平均值。
4、 C4H检测:
①分光光度计检测:立即以分光光度计,,以对照管为对照,测定测定管的吸光度(A测定0)。准确孵育后,立即加入C4H终止液终止反应(备选方案),用C4H碱性基液调节pH,以分光光度计,,以对照管为对照,测定测定管的吸光度(A测定1)。注意:加入终止液终止反应不是必须步骤,可准确孵育后直接以分光光度计,,以对照管为对照,测定测定管的吸光度(A测定1)。②酶标仪检测:立即以酶标仪测定,其余同分光光度计检测操作。
计算:
C4H活性单位的定义:在该实验条件下,。