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肉桂醇脱氢酶检测试剂盒(肉桂酸比色法)
北京雷根生物技术有限公司
肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒(肉桂酸比色法) 简介:
肉桂醇脱氢酶(cinnamyl alcohol dehydrogenase, CAD)是催化香豆醛形成松柏醇的酶。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质,属于细胞木质素合成途径中间的关键酶,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
Leagene肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒(肉桂酸比色法)检测原理是以肉桂酸、NADP作为底物,在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法,于分光光度计检测吸光度,以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的肉桂醇脱氢酶活性,尤其适用于检测水果中肉桂醇脱氢酶活性,25T可以检测23-24个样本。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
自备材料:
1、蒸馏水
2、研钵或匀浆器
3、离心管或试管
4、低温离心机
5、水浴锅或恒温箱
6、比色杯
7、分光光度计
操作步骤(仅供参考):
1、准备样品:
①植物样品:取植物组织或水果中层果肉置于液氮中迅速研磨或匀浆,加入预冷的CAD
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Lysis buffer,离心,留取上清液,冻存,用于肉桂醇脱氢酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,冻存,用于肉桂醇脱氢酶的检测。
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用CAD Lysis buffer进行适当匀浆,,离心,取上清液,冻存,用于肉桂醇脱氢酶的检测。
④高活性样品:如果样品中含有较高活性的肉桂醇脱氢酶,可以使用CAD Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。
2、配制CAD Assay buffer工作液:取1支NADP完全溶解于CAD Assay buffer,即为CAD Assay buffer工作液。该NADP工作液4℃保存1周,-20℃保存3个月。
3、加样:按照下表设置对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的CAD活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置2平行管,求平均值。
4、 CAD检测:立即以分光光度计,,以对照管为对照,测定测定管的吸光度(A测定0)。准确孵育后,立即加入CAD终止液终止反应(备选方案),以分光光度计,,以对照管为对照,测定测定管的吸光度(A测定1)。注意:加入CAD终止液终止反应不是必须步骤,可准确孵育后直接以分光光度计,,以对照管为对照,测定测定管的吸光度(A测定1)。
计算:
CAD活性单位的定义: