医学免疫学实习指导.doc

西安交通大学医学院免疫教研室
二00四年一月
主编:刘如意
主审:袁育康范桂香
参编:谢明王军阳周晓勃雷艳君任会勋史霖

医学免疫学
实习指导
目录
免疫学实验的目的和要求 2
实验室规则 2
第一篇非特异性免疫检测 3
实验一血脑屏障作用 3
实验二吞噬细胞的功能试验 4
实验三溶菌酶的溶菌作用 7
实验四血清总补体活性测定(CH50单位测定) 9
第二篇特异性体液免疫检测 11
实验五凝集反应 11
实验六沉淀反应 17
实验七补体结合反应 25
实验八中和实验( Neutrlization test ) 29
实验九免疫标记技术 33
实验十免疫血清的制备及效价测定 40
实验十一体外抗体形成细胞检查法(溶血空斑实验 PFC) 43
第三篇细胞免疫检测 46
实验十二 E-玫瑰花环形成实验 46
实验十三淋巴细胞转化实验 48
第四篇:免疫病理反应 52
实验十四豚鼠速发型过敏反应 52
实验十五免疫复合物型超敏反应 53
实验十六豚鼠结核菌素试验 55
实验十七小鼠 DNFB 试验 56
免疫学实验的目的和要求
•每次实验前必须做好预习,明确本次实验的目的、内容、操作要点和相关的理论知识。
•进入实验室必须严格遵守实验室规则。
•实验中听从老师指导,依照三严(严肃、严格、严密)要求进行实验,做好实验记录。
•认真观察分析实验结果,写出实验报告。实验中遇到的有关问题,用科学的态度总结探讨其原因,培养分析问题和解决问题的能力。
实验室规则
•进入实验室必须穿好白大衣。
•除实验中必须的学习用品外,不要放实验台上。
•实验室内不允许吃食品、饮水,严禁吸烟。
•实验中一定要保持实验室安静,不要大声喧哗,严禁打闹。
•实验要按老师要求操作,如发现问题要及时报告指导老师。
•爱护实验器材,如有损坏应及时报告老师,需赔偿者按规定办理。
•实验完毕要清理台面,需冲洗者按要求冲洗,需收回者按要求摆放整齐收回。
•离开实验室时,一定要有专人负责关好门窗、水源及照明设备。
第一篇非特异性免疫检测
实验一血脑屏障作用
[基本原理]
血脑屏障由软脑膜、脉络丛的毛细血管壁和包在壁外的神经胶质细胞形成的胶质膜构成,起着天然的屏障作用,可以阻挡病原微生物及毒性产物、异物颗粒包括染料颗粒等从血流进入脑组织和脑脊液内,从而保护中枢神经系统免受损害。
[实验材料]
2只小鼠。 1ml无菌注射器(配4号针头)。 5%台盼蓝水溶液。
生理盐水 。眼科剪子和镊子等。
[实验方法]
•用 1ml无菌注射器吸取5%台盼蓝水溶液经尾静脉注入两只小鼠体内,,更换注射器,。
• 5-10分钟后观察小鼠皮肤,尤其是眼、嘴的颜色变化。
•于 30-60分钟,见小鼠眼、嘴呈现蓝色,即窒息死亡,腹部向下固定。
•由头到尾沿背中线剪开皮肤,暴露皮下、肌肉和内脏,观察颜色变化。
•小心剖开颅骨和椎骨,暴露脑和脊髓,与皮下、肌肉及内脏比较;并比较 2只小鼠有何不同。
[实验结果]
未经颅内注射的小鼠,眼、耳、鼻皮下及肌肉均呈现明显的蓝色,但脑、脊髓均未变色;而经颅内注射的小鼠上述部位可呈现明显的蓝色。
[注意事项]
•台盼蓝水溶液要经过滤后方可使用。
•尾静脉注射要从远断进针;如推注容易,表明进入了血管;如引起皮下凸起或发白,说明未进入了血管;拔出针头,从稍近断进针。
实验二吞噬细胞的功能试验
巨噬细胞能吞噬鸡红细胞、中性粒细胞可吞噬多种细菌,如葡萄球菌等。将巨噬细胞和中性粒细胞分别与鸡红细胞、表皮葡萄球菌混合,孵育一定时间后涂片染色镜检;见巨噬细胞可吞噬鸡红细胞;中性粒细胞可吞噬葡萄球菌,可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数。在巨噬细胞中亦可见到鸡红细胞发生形态改变。具此可判断两类吞噬细胞的吞噬功能和消化功能,用以评价机体的免疫状态。
[实验目的]
证实吞噬细胞的吞噬作用。了解机体的非特异免疫防护作用。
一、豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用測定(大吞噬) :
[基本原理]
淀粉可以刺激豚鼠腹腔引起非感染性炎症滲出,在腹腔局部出现较多巨噬细胞,巨噬细胞则能吞噬注入腹腔的鸡红细胞等较大异物。
[实验材料]
•实验动物:豚鼠
•鸡红细胞悬液:从鸡翼下静脉或心脏取血,按 1 : 5比例保存于Alsever氏保养液中,放4 C°冰箱可用1个月,用前将鸡红细胞用生理盐水洗3次,第3次洗涤 2000r/min,5min,弃上清,压积细胞用生理盐水配制为5%鸡红细胞悬液,供大吞噬试验用。
• 5%淀粉肉汤溶液、姬姆萨染液、玻片、注射器等。
[实验方法]
•取无菌 5%淀粉肉汤