QS2634纤维素(CLL)含量试剂盒说明书.doc

QS2634纤维素(CLL)含量试剂盒说明书
货号:QS2634 规格:50管/48样
纤维素(CLL)含量试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起,是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维,是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。
测定原理:
纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 50mL× 1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 10mL× 1 支,4℃保存。
样品的前处理:
1、细胞壁的提取:取约 样本,加入 1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴 20min,
冷却至室温,4000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀加入 %乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
2、纤维素的提取:称取烘干的 CWM 约 5mg,加入 蒸馏水充分匀浆,匀浆液转移至 EP
管中,用蒸馏水定容至 ,置于冰水浴中,缓慢加入 浓硫酸,混匀,冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min,取上清液,用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制:在试剂二中加入 4mL 试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用不完的试剂 4℃保存一周;
4、加样表(在 EP 管中反应):
别读取空白管和测定管吸光值