纳豆芽孢杆菌分离及纳豆激酶活性的分析.pdf

安徽农业大学
硕士学位论文
纳豆芽孢杆菌分离及纳豆激酶活性的研究
姓名:李小丽
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:唐欣昀
20090601
为:�.��甃�����甿�ā����·����.�~、������腎.�~、�.����鎛.����弧�摘要为�%、�%、�%、�%,而终浓度为��儿的�缘鞍酌富盍τ屑せ钭饔茫��.�簟��~·血~、�.����.���弧�纳豆是日本的一种传统食品,具有很高的营养价值,其主要的活性成分——纳豆激酶具有显著的溶解血栓的功能。纳豆激酶作为一种新型的溶栓药物,与目前临床上常用的治疗血栓的药物链激酶、尿激酶比较,克服副作用大、体内半衰期比较短、价格昂贵等局限性,具有安全性高、可口服、溶栓效率高、药效时间长等突出优点,具有广阔的开发应用前景。本文主要是对筛选出的纳豆芽孢杆菌菌株展开生理学的相关研究,探讨纳豆芽孢杆菌的蛋白酶特性、纳豆芽孢杆菌中纳豆激酶的分离及不同理化因子对液体发酵产纳豆激酶的影响,为进一步的研究提供理论依据。本文首先分离纳豆芽孢杆菌。因待分离菌株为纳豆枯草芽孢杆菌,而纳豆枯草芽孢杆菌具有耐盐耐热的特性,故将经高温处理的纳豆菌菌悬液稀释涂布于高盐培养基上进行目的菌株的初筛,选择具有芽孢杆菌特征的革兰氏阳性菌株,将初筛菌株点种于脱脂牛奶培养基进行复筛。最终由纳豆茵粉中获得�昃�辏���狟�挥勺灾�纳豆中获得�昃�辏�直鹈��狟��、�.����、��、�.�6哉�株菌株进一步进行生理生化鉴定试验,鉴定出这�昴啥咕��质粲诳莶菅挎吒司������帧�对纳豆芽孢杆菌蛋白酶的特性进行了一系列的研究。筛选得到的�昃�昃�哂�产蛋白酶的能力。在�值、温度、金属离子等理化条件对��菌株蛋白酶活性影响的试验中发现:纳豆芽孢杆菌�.��甑鞍酌富盍υ趐�.��.�段�诒浠�淮螅��低于�甇和高于�.�泵富盍ο灾�陆担荒啥寡挎吒司鶥���甑鞍酌缸饔玫�最适温度为�℃,温度对蛋白酶活力的影响显著;���疞终浓度的金属离子��、��、��、��对纳豆芽孢杆菌��蛋白酶活力有明显的抑制作用,抑制率分别含����疞的��菌株粗酶液蛋白酶活力是空白粗酶液蛋白酶活力的��ァ�硫酸铵饱和沉淀法分离纳豆芽孢杆菌��菌株粗酶液中的纳豆激酶,可先向粗酶液中加适量的硫酸铵至�%硫酸铵饱和度,����/��离心���,弃沉淀;向上清液中继续加适量硫酸铵至�%的硫酸铵饱和度,����/��离心���,弃上清,沉淀即为初步分离得到的纳豆激酶。用试管定量法分别测定了分离得到的�昴啥寡挎吒司��甏置敢褐械哪啥辜�酶的纤溶活力,�、��、�.�����������昴啥辜っ赶巳芑盍Ψ直�为确定纳豆芽孢杆菌液体发酵产纳豆激酶的最佳条件,以普通发酵培养基为基础,分别改变培养基的成分及含量,考察培养基组成对纳豆芽孢杆菌液体发酵产纳豆�����
%����.�%��,��%������.��龇��琾���,接种量为�胱�激酶活力的影响:分别改变培养温度、培养时间等,考察培养条件对纳豆芽孢杆菌液体发酵产纳豆激酶活力的影响。以�サ穆笱刻俏L荚矗�.�サ慕湍父辔5T矗�液量为��/���奶跫�拢�����痳��〈才嘌���2�父叻迤凇S呕�蟮�液体发酵产酶培养基产纳豆激酶活力比基础培养基的酶活力提高了��倍。关键词:纳豆芽孢杆菌,蛋白酶,纳豆激酶,条件优化Ⅱ
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