紫心甘薯多糖的分离及组分抑癌活性研究.doc

紫心甘薯多糖的分离及组分抑癌活性研究.doc紫心甘薯多糖的分离及组分抑癌活性研究
天然活性多糖是一类结构复杂的生物大分子物质,作为植物细胞壁的结构成分广泛存在于自然界中,具有机体免疫调节、抗氧化、降血糖血脂等作用近年来,多糖研究日益受到人们的关注。目前,实验室常用热水浸提和低温碱提两种方法来获得天然活性多糖,如香菇多糖,海藻多糖等M。已有研究表明,采用热水浸提所得的天然植物多糖(如人参多糖)经纯化在体内外均具有一定的抗肿瘤活性0,也有报道紫心甘薯水提粗多糖在体内有一定的抑瘤效果,但尚未见到关于紫心甘薯多糖分离及组分抑癌研究的相关报道。本研究结合浙江省临安市太阳镇紫心甘薯基地的开发课题,以紫心甘薯“渝紫263”为材料,通过低温碱提获得紫心甘薯粗多糖,研究紫心甘薯多糖组分的分离条件,并借助体外细胞实验和红外光谱等检测手段初步探究紫心甘薯多糖的结构成分及组分的抑癌作用,为进一步开发和利用紫心甘薯提供理论指导和实验依据。
1材料与方法

,由浙江省临安市太阳镇紫心甘薯实验基地提供;肿瘤细胞株Hela、HepG:,由浙江大学医学院提供;DEAE-Cellulose,华东医药试剂;CM-Cellulose,华东医药试剂;SephacrylS-t00,美国GE公司;D-葡萄糖醛酸,国药集团试剂;咔唑,中国远航试剂;胎牛血清,杭州四季青生物工程材料有限公司;RPMI1640培养基,Hyclone公司;MTT,Sigma公司(临用时用PBS配置成5mg/ml溶液,分装避光-20°C保存);DMSO,Sigma公司;
标准单糖(葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖)、NaCl、苯酚、浓硫酸、甲苯胺蓝等试剂均为国产分析纯。
,美国GE公司;,北京医用离心机厂;高速冷冻离心机,BECKMANCOULTER;可见分光光度计,上海棱光技术有限公司;RE-2000旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂;电子天平,德国IKA;磁力搅拌器,IKARHbasicl;红外光谱仪470FT-IR,NEXUS公司;倒置显微镜,OLYMPUS;二氧化碳培养箱,美国FormaScientific公司;516MC酶标仪,国产;各种尺寸层析柱,上海华美实验仪器厂;薄层层析硅胶板,浙江台州;真空干燥装置,上海一恒科技有限公司;层析缸,国产。

。甘薯洗净、去皮、烘干后粉碎;用3倍体积95%乙醇于80C水浴中回流脱脂2h,重复一次,晾干后在70C水浴中水提2h,离心分离上清液,残渣重复操作一次;合并上清液,浓缩,三氯乙酸法除蛋白,用3倍体积85%乙醇沉淀多糖;无水乙醇、丙酮反复洗涤;将沉淀在低温下用10%NaOH以1:10的比例进行碱提,浓缩,蒸馏水透析48h;用3倍体积85%乙醇沉淀多糖;离心取沉淀,用无水乙醇反复洗涤;真空烘干后得PPSP粗多糖。
,以葡萄糖为标准单糖,绘制葡萄糖标准曲线;硫酸咔唑法检测糖醛酸含量,以葡萄糖醛酸为标准品,绘制糖醛酸含量测定标准曲线。。离子交换柱的选择:(K2HPO4-CH2PO4),