小麦耐盐相关基因的克隆与功能分析.pdf

诃�占博士学位论文��尤小麦耐盐相关基因的克隆与功能分析■删骂‘‘肠���乒�学校代码:中图分类号:秘密密级:作者姓名:指导教师:导师单位:学科专业名称:王刚教授黄占景教授河北师范大学生命科学学院二��四炅�月六�研究方向:学科门类:论文开题日期:赵芊分子生物学植物学理学��年�月���������������,
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论文作者�┟�:姘指导教师确认�┟�:泐����月户日洲年�拢�谌�论文作者�┟�:龟彳指导教师�┟�:参么∽学位论文版权使用授权书学位论文原创性声明�C艿难�宦畚脑谌��u窒缭拢�日珈矽护年∥月/��本人所提交的学位论文《小麦耐盐相关基因的克隆与功能分析》,是在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的原创性成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中标明。本声明的法律后果由本人承担。本学位论文作者完全了解河北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权河北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。年解密后适用本授权书��
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摘要同源性为�%,蛋白同源性高达�%,故命名为小麦�旷.����÷笱涡财认碌母�⒘L宓鞍字首楸冉�盐害是导致农作物减产的主要因素,培育耐盐转基因作物是一个快速有效的解决方法,但缺乏有效的目的基因是限制植物耐盐基因工程进一步发展的瓶颈。本论文的主要目的就在于寻找新的小麦耐盐相关基因,研究它们的功能,为深入了解植物耐盐分子机制及培育耐盐高产的转基因小麦提供有价值的参考。本论文先后通过蛋白质组学和基因芯片技术对盐胁迫下小麦耐盐突变体������兔粞瓮槐涮������进行了比较分析,寻找并克隆了�鲂÷竽脱蜗喙鼗�颍�⒔�渥;�侥饽辖婧退�局薪�心脱涡�分析,主要实验结果如下:通过蛋白质双向电泳技术分离小麦耐盐突变体和敏盐突变体的根微粒体蛋白质组,共得到大约��龅鞍字实恪1冉险饬礁鲋晗翟谘涡财惹昂蟮牡鞍字时泶锉浠��⑾植�分蛋白上调表达,部分蛋白下调表达,表明小麦耐盐突变体与敏盐突变体在耐盐性方面存在差异是植物体内大量蛋白表达协同变化的结果。应用���甌���际醵��������诺鞍椎憬�兄势追治觥U馑母龅�白点在盐胁迫后表达显著增强,且在耐盐突变体中的表达量均明显高于在敏盐突变体中的表达量。�号蛋白点质谱鉴定为小麦亲环素,�号蛋白点质谱鉴定为������亚基蛋白,�号和�号蛋白点质谱鉴定结果为阴性,这可能与小麦蛋白质数据库极不完善有关,也可能这两个蛋白是新的未知蛋白,这需经氨基酸测序加以确定。��琂、麦�瓾�瓵����腔��虻目寺『凸δ芊治�根据质谱鉴定结果,利用电子克隆技术并结合���方法成功克隆出小麦�腔�ǔ���蛄小8没�蛉ǔの���,含有���耐暾�7旁�读框,编码��霭被�帷>璑��瓸��比对,该基因与大麦�������腔����腔��������。该基因已登陆����,登陆号为����。为了检测非生物胁迫下小麦�������腔��虻谋泶锬J剑�捎檬凳庇ü舛�量��姆椒ǎ�愿没�蛟谘巍��、��屠湫财认碌南喽员泶锪拷�蟹治觯�⑾��腔��蛟谛÷竽脱瓮槐涮逯惺苎魏虯�诱导表达增强,受��屠湟种票泶锝档停�����������������’·
多小麦盐胁迫响应基因��的克隆和原核表达并且在叶与根中的表达存在组织特异性。比较�腔�谀脱斡朊粞瓮槐涮逯械谋泶锉�化,发现盐及��财群螅珽亚基基因在耐盐突变体中的表达均高于在敏盐突变体中的表达。以上结果从分子水平上验证了�腔��蛴胄÷竽脱文芰Φ恼�喙毓叵怠�构建植物双元表达载体并转化拟南芥,对获得的纯合体转基因拟南芥进行耐盐性分析。结果显示,过表达�腔��虻哪饽辖嬖谘涡财认拢�涿确⒙屎透�ぜ皏���籄���活性均高于对照,细胞内���康陀诙哉眨��逯仓甏婊钭刺�糜诙哉眨�砻鞴�泶�小麦�腔��蚩稍銮孔;�蚰饽辖娴哪脱文芰Α�以上实验结果已投稿于����������跋煲蜃�.����嗉��稿,已修回。通过基因芯片技术,对盐胁迫下小麦耐盐突变体�����械淖芴寤�虮泶锝��研究,获得了���鲂÷蠡�虻牟钜毂泶锿计�已发表于《中国农业科学》��年第�期�Q∪⊙涡财群蟊泶锷�叩腃����.�盘秸胄蛄校�ü�缱涌寺〖际鹾蚏���方法成功克隆到该探针的全长��序列。该基因全长��������的完整开放阅读框,编码��霭被�帷>璑��瓸��比对,该基因是一个全新的未知蛋白基因,与水稻�������和拟南芥������幕�蛲�葱苑直鹞��ズ��ィ�鞍淄�源性分别为�%和�%,将其命名为���������8没�因已登陆����,登陆号为�