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免疫酶斑点试验
Dot-ELISA
:单克隆抗体的制备
实验内容
实验目的
。
。
。
免疫酶斑点技术的原理
硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力, 在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。
将免疫物质吸附于纤维素膜后,则可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。
免疫酶斑点技术的特点
-Ab反应,具有高特异性;
,具有高敏感性;
(1)微量抗原的检测
(2)抗体分泌细胞、细胞因子产生细胞的筛选
(3)自身抗体的检查
一、实验内容
免疫酶斑点试验
检测微量人IgG
二、实验材料
Ag:人IgG
阴性对照:NS
酶标记抗体:羊抗人IgG
酶:辣根过氧化物酶(HRP)
底物:邻苯二胺(OPD)
封闭液:5%脱脂奶粉
洗涤液:磷酸盐缓冲液;
三、实验方法(直接法)
,待干后用笔做好标记;
-10μl和NS分别加于相应格内,室温自然干燥!
(用震荡器);
,每次1分钟,最后1次吸干;
,震荡15分钟,(用震荡器);
,震荡洗涤3次,每次1分钟,最后1次吸干;
,震荡15分钟左右观察结果(用震荡器)。
结果判断
无色为阴性;
明显棕色斑点为阳性。
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