免疫酶斑点试验
Dot-ELISA
实验目的
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免疫斑点酶技术的原理
硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力, 在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。
将免疫物质吸附于纤维素膜后,可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。底物经酶反应后形成有色沉淀,使固相膜染色。
包被未知抗原
NC
酶标抗体
底物
直接法Dot-ELISA
包被抗原
NC
待检抗体
酶标抗体
底物
间接法Dot-ELISA
免疫酶斑点技术的特点
1)特异性强,假阳性较少;
2)敏感性高,NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯,
检出抗原的敏感性较常规ELISA法高6~8倍; 3)试剂用量少,比ELISA法至少节约10倍; 4)检测结果可长期保存,便于复查。
1. 小组为单位
实验方法及注意事项
2. 膜片、抗原、洗涤液、吸水纸在实验台上
3. 酶标抗体放置在冰箱,使用前取出
4. 底物临用前配置
5. 震荡器全班一台, 调整好频率后不要乱动
方法(直接法)
1. 取硝酸纤维素膜片, 用笔做好标记方便加样;
2. 将稀释的抗原液2-5μl加于相应格内,
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