SOD酶生产.ppt

超氧化物歧化酶(SOD)的生产
一. SOD的概述

超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶,是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。

按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种

SOD对氰化物和H2O2的敏感性
SOD的吸收光谱特性
SOD稳定性及影响因素
SOD的作用
SOD对氰化物和H2O2的敏感性
长时间用过氧化氢处理可使CuZn-SOD和Fe-SOD失活,而Mn-SOD不受影响

CuZn-SOD具有独特的紫外吸收光谱。由于色氨酸和酪氨酸的含量较低,它在280 nm处并没有最大吸收峰。
CuZn-SOD的可见光最大吸收波长都在680 nm左右, 这反映了酶分子中Cu2+的光学特性。

PH、热、蛋白酶的影响:~,~pH11间能稳定存在。, CuZn-SOD中95%的Zn要脱落,,SOD的构象会发生不可逆的转变而使酶失活。
SOD对热的稳定性与溶液中离子强度有关。当离子强度很低时,即使加热到95℃, 其活性损失也很少其他因素:SOD活性受饮料的色泽、成分、酸碱度、乙醇含量等多种因素的影响,只有在无色、近中性、无乙醇饮料中SOD活性较稳定。另外还发现有机溶剂和Cl对SOD的活性具抑制作用

它催化超氧阴离子转化为H2O2和O2的反应, 即催化超氧阴离子自由基O2-·发生歧化反应, 从而清除O2-,2O2-+2H+→H2O2+O2, 在生命体的自我保护系统中起着极为重要的作用, 在免疫系统中也有重要的功,因而它能防御氧毒性,增强机体抗辐射损伤能力,防衰老。
实验器材及试剂
烧杯,试管,容量瓶,钵体,离心机,真空干燥箱,电子天平,恒温水浴槽,紫外分光光度计,刻度吸管,微量注射器,透析袋。
新鲜蒜瓣、,氯仿—乙醇(3:5)混合液,50mmol/L的Tris-HCL、10mmol/L的HCL、50mmol/L的邻苯三酚。
工艺流程
破碎组织细胞
去除杂蛋白
SOD的沉淀分离
测定邻苯三酚自氧化速率
测定并计算SOD样酶活性
实验原理
邻苯三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出 O2-,生成带色的中间产物,中间物的积累在滞留30~45s后,与时间成线性关系,一般线性时间维持在4min的范围内,中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时,由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2,从而阻止了中间产物的积累,因此,通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。
操作步骤
基本步骤:
原料→清洗→破碎→浸提→热变性→高速冷冻离心→调整PH→高速冷冻离心→加丙酮沉淀→高速冷冻离心→溶解沉淀→透析→冷冻干燥→成品