PCR法突变质粒构建
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
标准的PCR反应体系
4种dNTP混合物各200umol/L
引物各10~100pmol
模板DNA ~2ug
Taq DNA聚合酶
Mg2+
72℃
94℃
55℃
PCR循环
1
2
3
4
5
22
55
72
94
时间(min)
温度
(℃)
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
适温延伸
3
高温变性
1
低温退火
2
重复1~3步
25~30轮
目的DNA片段
扩增100万倍以上
DNA双螺旋
DNA单链
与引物复性
DNA变性
形成2条单链
子链延伸
DNA加倍
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
1
2
3
4
5
22
55
72
94
时间(min)
温度
(℃)
适温延伸
3
高温变性
1
低温退火
2
重复1~3步
25~30轮
目的DNA片段
扩增100万倍以上
DNA双螺旋
DNA单链
与引物复性
子链延伸
DNA加倍
DNA变性
形成2条单链
模板DNA
95℃
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
95℃
50℃
引物1
引物2
DNA引物
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
50℃
引物1
引物2
DNA引物
72℃
Taq酶
Taq酶
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
72℃
第1轮结束
95℃
第2轮开始
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
95℃
50℃
72℃
Taq
Taq
Taq
Taq
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
72℃
第2轮结束
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