右旋雷贝拉唑钠微生物限度方法验证报告.docx

右旋雷贝拉唑钠微生物限度检查法验证报告
供试品
批号:
规格: 原料药
来源: 江苏奥赛康药业
验证起止时间:
2、培养基
胰酪胨大豆琼脂培养基批号: 140304
沙式葡萄糖琼脂培养基批号: 131230
胰酪胨大豆肉汤培养基批号: 130426
均为符合药典规定的干燥培养基。由中国药品生物制品检定所提供。
上述培养基的灵敏度检查和无菌性检查均符合药典规定。
3、仪器
电子天平: KF3102 江苏凯丰集团有限公司
细菌培养箱: GNP-9160 上海精密实验设备有限公司
真菌培养箱: BK6160 美国赛默飞世尔科技公司
无菌隔离器: HTY-SZ1806B 杭州泰林生物技术设备有限公司
4、试剂与稀释液
-蛋白胨缓冲液,青岛蓝雁绿检生物技术有限公司
5、菌种
金黄色葡萄球菌[(B)26003] 第 3 代
大肠埃希菌[(B)44102] 第 3 代
铜绿假单胞菌[(B)10104] 第 5 代
枯草芽孢杆菌[(B)63501] 第 5 代
白色念珠菌[(F)98001] 第 5 代
黑曲霉[(F)98003] 第 5 代
上述菌种均由江苏省药品检验所提供。
6、验证依据
中国药典2015年版四部(通则1105-1106 )非无菌产品微生物限度检查
7、实验操作
菌液制备
、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至10ml的胰酪胨大豆肉汤培养基中,置30~35℃培养18~24小时,分别取上述培养物1ml加9ml -蛋白胨缓冲液,10倍递增稀释制成适宜浓度的菌悬液。
,置20~25℃培养24~48小时,取上述培养物1ml加9ml -蛋白胨缓冲液,10倍递增稀释制成适宜浓度的的菌悬液。
,置20~25℃培养5~7天,使大量的孢子形成。加入3~%(ml/ml)聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,将孢子洗脱并过滤孢子悬液至无菌试管内,%(ml/ml)聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
供试液制备
称取供试品10g, 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,充分振摇混匀,制得1:10的供试液,取50ml均分成五份(每份10ml)。
验证试验—细菌、霉菌及酵母菌计数验证
试验组
需氧菌:
取上述均分好的三份供试液,、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌的适宜浓度菌液,混匀,使每1ml均分供试液含菌量不大于100cfu; 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜后,分别取含菌供试液1ml,通过直径约为50mm,。每膜用500ml -蛋白胨缓冲液进行冲洗,冲洗后取出滤膜。菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基上,于30~35℃培养不超过3天。
霉菌和酵母菌:
另取上述剩余的两份供试液,、黑曲霉的适宜浓度菌液,混匀,使每1m