发菜蛋白质组双向电泳技术的建立及优化.pdf

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西北植物学报,2009 ,29 (8) :1550 - 1556
Acta Bot . Boreal. Occident . Sin.
文章编号:1000 4025 (2009) 08 1550 07
发菜蛋白质组双向电泳技术的建立及优化
梁文裕1 ,2 ,王星2 ,焦广飞1 ,张喜娟2 ,陈伟1
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(1 福建农林大学生命科学学院,福州 350002 ;2 宁夏大学生命科学学院,银川 750021)
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摘3 要:为建立适用于发菜( N ostoc f lagelli f orme) 蛋白质组研究的双向电泳技2术,对发菜蛋白质的提取、裂解、上
样量、IEF 及 SDS PA GE 电泳等关键步骤进行了优化,结果显示:发菜蛋白质主要分布在 p H 4~7 范围内,采用改
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良 TCA 法可提高提取液中蛋白质的含量和双向电泳图谱的分辨率,裂解液含 60 mmol/ L DTT ,24 cm IP G胶条上
样量 1. 5 mg 时不仅提高了蛋白质的溶解性,而且改善了双向电泳的分离效果,得到近 800 个蛋白点,且蛋白点清
晰,图谱分辨率较好。采用优化后的双向电泳体系提高了发菜蛋白质双向电泳的分辨率和重复性,建立起一套适
用于发菜蛋白质组分析的双向电泳方法。
关键词:发菜;双向电泳;蛋白质组学
中图分类号:Q816 文献标识码:A
Establishment and Optimization of Two dimensional Gel
Electrophoresis for Proteome of Nostoc f l a gelli f orme
L IAN G Wen yu1 ,2 ,WAN G Xing2 ,J IAO Guang fei1 ,ZHAN G Xi juan2 ,CH EN Wei1
(1 School of Life Sciences ,Fujian Agriculture and Forest University ,Fuzhou 350002 ,China ;2 School of Life Sciences ,Ningxia U
niversity , Yinchuan 750021 ,China)
Abstract :In order to establish a two dimensional gel electrop horesis (2D E) protocol for proteomic st udy of
N ostoc f lagelli f orme ,we optimized extracting met hod of total protein ,lysis met hod ,loading quantity and
t he key process of IEF and SDS PA GE. The result s showed t hat t he protein spot s were distributed mainly
within t