琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制
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实验目的
学习动物的处死与组织匀浆的方法
学习离心机的使用方法
进一步理解酶的竞争性抑制原理
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实验原理
竞争性抑制是指分子结构与底物相识的抑制剂可与底物竞争性结合酶的活性中心,抑制酶的活力。
竞争性抑制剂的抑制程度取决于抑制剂与酶的亲和力及与底物的相对比例。
草酸与琥珀酸分子结构相似,是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。在体内,琥珀酸脱下的2H经电子传递链传递,最后与氧结合生成水,并释放能量。
在体外则用甲烯蓝(蓝色)作为受氢体,甲烯蓝接受琥珀酸脱下的2H,被还原为甲烯白(白色)。
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怎样判断酶活力被抑制的程度?
在甲烯蓝含量一定的情况下,蓝色消退的快慢程度可指示琥珀酸脱氢酶的活力,因此,可依据蓝色消退的时间来判断该酶活力被抑制的程度。
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实验器材与试剂
器材
研钵,手术剪,手术镊子,2mL移液管,1000微升的微量可调式移液器,10mL离心管,低速离心机。
试剂
pH=
%琥珀酸钠溶液
%草酸钠溶液
%甲烯蓝溶液
生理盐水
5
实验操作
肝糜液的制备。取小白鼠一只,用颈椎脱臼法处死。剖腹将肝脏全部取出,置于研钵中,用生理盐水洗净肝脏中的血液。
用剪刀剪碎肝脏,充分研碎至糊状,然后分批加入少量磷酸缓冲液,边加边磨,总共加入7mL。
搅匀后倒入圆底离心管中,离心约3min,将上清液倒入一支试管中备用,此即为含有琥珀酸脱氢酶的肝糜液。
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编号
1
2
3
4
5
%琥珀酸钠溶液mL
0. 05
%草酸钠溶液mL
蒸馏水mL
2.
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