分析化学实验：荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量.ppt

实验二十八
荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量
S2
S1
S0
T1
吸
收
发
射
荧
光
发
射
磷
光
系间跨越3
内转换
振动弛豫
能
量
l 2
l 1
l 3
外转换
l 2
T2
内转换
振动弛豫
一、实验目的

- 4500荧光分光光度计
二、方法原理
利用荧光分析方法,测定能产生荧光的物质含量,对不能产生荧光的物质,可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂,与非荧光物质形成较纯的荧光化合物,然后进行测定,是一种高灵敏度的分析方法。
定性依据:
激发光光谱
荧光光谱
定量依据:
当 l c≦,将括号项近似处理后:
F=  I0  l c = Kc
定量方法
标准曲线法:
配制一系列标准浓度试样测定荧光强度,绘制标准曲线,再在相同条件下测量未知试样的荧光强度,在标准曲线上求出浓度.
比较法:
在线性范围内,测定标样和试样的荧光强度,比较.
荧光仪器组成:
激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。
特殊点:有两个单色器,光源与检测器通常成直角。
三、实验内容
(一)硫酸奎宁激发光谱的绘制
mol/L硫酸溶液为参比溶液,用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。
固定荧光波长为443 nm,从300 nm到400 nm,每间隔10 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标,荧光相对强度为纵坐标,在坐标纸上绘出激发光谱图,指出最大激发波长λmax为345 nm。
(二)硫酸奎宁荧光光谱的绘制
用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。
从380 nm到600 nm,每隔20 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标,荧光相对强度为纵坐标,在坐标纸上绘出荧光光谱图,指出最大发射波长λmax为445 nm。