水质量微生物检测.ppt

模块三水质量微生物检测
实验十水体微生物样品的采集及水中细菌总数测定实验十一水源的大肠菌群检测与生理生化测定实验十二肠道杆菌的抗原性检测
水是一种宝贵的自然资源,水质的好坏直接影响人类健康和工农业产品质量的高低。生活用水的水源(河水、湖水、池水和溪水等)常常被工业废水或生活污水或人畜的粪便所污染,这些污染物往往含有不同类型的微生物,有腐生性的和病原性的。腐生性微生物对人体无害,但是病原性微生物则能引起传染病的发生。比如霍乱、伤寒、细菌性痢疾、脊髓灰质炎和传染性肝炎等的流行。因此必须对生活用水及水源水进行严格的细菌学检查。水的微生物检查通常包括两个项目:细菌总数和大肠菌群测定。水体的细菌总数可以说明被有机物污染的程度,细菌数越多,有机物含量就越大。细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中经37℃ 24小时培养后所生长的平板菌落数。我国自来水标准为1ml水样的细菌总数不得超过100个,大肠菌群少于3个。
实验目的
;
;
。
实验十水体微生物样品的采集及水中细菌总数测定
实验原理
平板活菌计数法:是根据微生物在固体培养基上所形成的菌落(即由一个单细胞繁殖而成且肉眼可见的子细胞群体)的生理及培养特征进行的。即一个菌落代表一个单细胞。菌落由单个细胞生长繁殖而成,因此通过统计菌落数就可计算出样品的含活菌数。
菌落总数检测程序:
水样
适当的稀释度
选择2个稀释度,每个稀释度重复3皿,采用倾注法
培养
菌落计数
由于一些厌氧菌和有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌是很难在普通琼脂平板上生长繁殖的,所以细菌菌落总数并不表示实际的所有细菌总数,实际只是嗜中温需氧菌的菌落总数,是一个近似值。水样的菌落总数是作为判定水源是否被污染的标志。
实验器材
:牛肉膏蛋白胨固体培养基(%);
(灭菌处理),Eppendorf离心管,Tips,微量加样枪;
,250ml三角瓶(灭菌处理),灭菌培养皿。
实验步骤
一、水样采集
1. 自来水的采集:用酒精灯火焰对自来水龙头灼烧3分钟灭菌,开放水龙头流水5分钟后将水龙头关小,在水龙头旁拔去灭菌三角瓶塞,迅速将瓶口对准水龙头接取水样若干,盖好瓶塞待分析。
2. 池水的采集:用ETC--1M水深样品,然后至于灭菌三角瓶待分析。
二、样品处理
1. 自来水可直接用于涂布平板或倾注平板实验;
2. 池水需要进行适当稀释:在dorf管中取100μL池水加900μL无菌水,混匀,制备10-1的稀释液
3. 水沟水需要进行适当稀释:相同方法,得到10-2~10-3的稀释液;
三、样品的平板操作
1. 自来水样
无菌操作吸取1mL自来水样放入灭菌培养皿中,共做2皿;
倾注约15mL 经融化并冷却至45℃左右(以不烫手为宜)的牛肉膏蛋白胨培养基,立即在桌面作平面旋摇。注意样品与培养基混合时,可将皿底在平面上先向一个方向旋转,然后再向相反方向旋转,使其充分混匀。旋转时小心,不要使混合物溅到皿边上方。皿底琼脂凝固后应在数分钟内将平皿倒置培养于37℃;
另取一无菌培养皿,倾注15mL牛肉膏蛋白胨培养基作为整个检测试验的空白对照。
2. 池水样
取原液和10-1稀释度的水样各1ml放入培养皿内,倾注15mL 融化后冷却的牛肉膏蛋白胨培养基,按照上述方法充分混匀,每个稀释度做2个平皿,然后置于37℃倒置培养。
2. 水沟水样
取10-2和10-3两个稀释度的水样各1ml放入培养皿内,倾注15mL 融化后冷却的牛肉膏蛋白胨培养基,按照上述方法充分混匀,每个稀释度做2个平皿,然后置于37℃倒置培养。