放免技术.ppt

放射免疫分析技术
(Radioimmunoassay,RIA)
一、标记免疫技术-基本概念
免疫技术:以抗原-抗体反应原理为基础,对样品中相应抗原或抗体进行检测。
标记技术:将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。
标记免疫分析:用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原、抗体,检测免疫反应结果并确定待检物。
标记免疫分析技术
特点:敏感性高,反应时间短,可用仪器检测结果
三大标记免疫分析技术:放射免疫、荧光免疫、酶免疫
检测方法检测范围
生化、常规 mg~μg(10-3 ~10-6 g)
荧光免疫、酶免疫免疫μg~ng(10-6 ~10-9 g)
放射免疫、发光免疫 ng~ pg(10-9 ~10-12 g)
PCR pg~fg(10-12 ~10-15 g)
二、放射免疫分析技术(Radioimmunoassay,RIA)
女科学家 (美,1921~)1950’末
发明(胰岛素),1977年获诺贝尔医学奖
早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析(RIA),稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)。该类技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点,广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析,对相关学科的发展起到了极大地推动作用。

定义:指原子核能自发地产生成分或能级的变化,然后变成另一种核素,变化时伴有射线的发射。
衰变方式:α、β、γ三种βγ用于放射性标记。
常用核素: β:3H、14C、32P
γ:125I、131T、51Cr、60Co
3. 放射免疫技术-原理及分类
放射免疫(RIA)以标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体来测定待检样品中抗原量。
免疫放射(IRMA)以过量标记抗体与抗原非竞争结合,采用固相免疫吸附载体分离游离和结合标记抗体。
广义放射受体分析(RRA)
放射配体结合分析(RBA)
4. 放射免疫分析-基本原理
竞争性结合反应的经典
标记抗原(Ag*)和
非标记抗原(Ag)与
限量抗体(Ab)竞争性
结合。
Ag*和Ag具有等
同的与Ab结合能力
Ab限量,Ag*定量,Ag*和Ag的量大于Ab结合位点,二者通过竞争方式与Ab结合;随着Ag增加,Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放射量降低,二者变化成函数关系。
以未结合的Ag*为F
Ag*Ab复合物为B
则B/F或B/(B+F)
与Ag的量变存在着函
数关系-剂量反应曲
线
注:T=B+F