HE染色.doc

HE染色步骤
一、HE染液的配制:
1、   Harris苏木素: 称取苏木素精  1g
一氧化汞 
硫酸铝钾  20g
量取无水乙醇  10ml
蒸馏水    200ml
苏木素溶于无水乙醇,钾明矾溶于蒸馏水,二者混合后煮沸,离火,加入氧化汞,用玻棒搅拌,试剂变为深紫色,立即移入冷水快速冷却,静置一夜,过滤,棕色小磨口试剂瓶密封保存。使用前加入5%冰乙酸4ml(或冰乙酸3滴)。
2、%伊红(水溶性): 称取伊红   
量取 95%乙醇 25ml
蒸馏水  75ml
先取少量蒸馏水加入伊红,用玻棒将伊红碾碎并搅溶,再加入全部蒸馏水,完全溶解后,再加入乙醇,最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。
3、1%盐酸水溶液:
盐酸    3ml
蒸馏水 297ml
混匀,白色试剂瓶保存。
4、中性树胶封片剂:
        往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干,加入二甲苯适量
用吸管调匀,有一定粘稠度即可。
试剂二甲苯    1瓶        Harris苏木素染液
无水乙醇  2瓶        1%盐酸水溶液
95%乙醇  2瓶        %伊红(水溶性)染液
中性树胶封片剂
二、染色步骤
  1、电吹风吹片或烤片,至溶蜡;
2、入二甲苯(I)中脱蜡5分钟,用吸水纸吸干液体;
3、入二甲苯(II)中脱蜡10分钟(切片透明),用吸水纸吸干液体;
    4、入100%乙醇(I)5分钟,用吸水纸吸干液体;
5、入100%乙醇(II)5分钟,用吸水纸吸干液体;
    6、入95%乙醇3分钟;
    7、入流水2分钟,用吸水纸吸干水分;
    8、 Harris苏木素染色 4~8分钟;
    9、自来水稍洗;
10、1%盐酸水溶液分化5~10秒(切片由蓝变红);
11、自来水洗返蓝15~30分钟;