he染色.ppt

-伊红染色法,是普通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死的一种染色方法。.+铝细胞核负电荷色酸(染料有色部分)伊红染色染色正负电荷的极性吸附正电荷色酸(染料无色部分)(细胞核着色)(5-15min),水洗盐酸乙醇溶液分化(30s),水洗伊红染色(1-3min),水洗氨水反蓝(30s),水洗90%乙醇(5min)80%乙醇(30s)100%乙醇(2次×10min)二甲苯(3次×5min)封片染色脱水透明封片脱蜡染色的时间,应根据室温,及组织的具体情况来确定,做之前做预实验。..注意事项(1)脱蜡。切片脱蜡后才能染色,且脱蜡应彻底。脱蜡好坏主要取决于二甲苯的温度和时间,如果二甲苯是用过一段时间,切片又比较厚,室温低应增加脱蜡时间,脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之一。(2)染色。根据实际情况,通过预实验得到最佳染色时间。一般情况下新配的苏木素染液中只需染1~3min左右,应根据染片的多少,逐步把染色时间延长。分化时间不易过长,分化应在镜下观察,分化过度,应水洗后重新在苏木素染液中染色,在水洗分化和使切片在自来水或稀的氨水中充分变蓝(蓝化)。新配的伊红染色块,切片染色不易过长,应根据染切片的多少逐步延长染色时间,切片使伊红染后,分化时间要短。.(3)脱水。染色后通过各级酒精脱水,从低浓度到高浓度。低浓度酒精对伊红有分化作用,切片经过低浓度时要短,向高浓度逐渐延长脱水时间,脱水不彻底,使切片发雾,在显微镜下组织结构模糊不清。(4)透明与封片。切片染色脱水后必须经二甲苯处理,使切片透明,才能用树胶封片。应引起注意的是,二甲苯纯度不纯使切片透明不够,会影响切片质量。.几种常见的染色问题脱蜡:切片中白色的区域脱蜡不彻底,染色液由于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。原因:①烤(烘)片温度太低,脱蜡前没有充分烤(烘)干。②二甲苯脱蜡时间不足,或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。对策:①用无水乙醇去掉玻璃片上的水分,重新二甲苯脱去石蜡。②切片需退回到脱蜡步骤,延长脱蜡时间,或跟换二甲苯,驼色、漂白、重新染色。.