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纤维素CMC酶、FPA酶和半纤维素酶测定
纤维素CMC酶

。

生产分析和质量控制部门适用。

纤维素CMC酶()水解羧基纤维素分子中β-,释放出的还原糖(以葡萄糖计)(DNS)反应,产生颜色变化,这种颜色变化与释放还原糖(以葡萄糖计)的量成正比关系,即与酶样品中的酶活性成正比。通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量,从而确定出酶的活力单位。

(分析纯)
(分析纯)
-二硝基水杨酸

(分析纯)
(分析纯)
(分析纯)
(分析纯)
(分析纯)


(恒温)50±1℃
±1℃
722型分光光度机计
㎎



-乙酸钠缓冲溶液(PH=)
溶液A:量取冰醋酸6ml,定容至1000ml,。
溶液B:,溶解后容至1000ml,。
以A:B=4:6的比例混合,低温冷藏备用。
DNS试剂:
溶液A:称分析纯NaOH 104g溶于1300ml水中,。
溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g,溶于2500ml热水中,再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。
将A、B溶液混合,定容至5000ml,贮存于棕色瓶中,暗处放置一星期后可使用。
CMC溶液:用羧甲基纤维素钠(CMC)%的溶液。
:
℃烘干至恒重。
,加10mg叠氮化钠防腐,4℃冷藏备用。

取1mg/ml标准葡萄糖液各0,,,,,,,,具塞,沸水浴中加热10分钟,冷却后定容至15ml,分光光度计550nm波长下测OD值,3次重复实验的均值用最小乘法相拟合Y=ax+b一元线性方程。由光密度值引得葡萄糖量。
CMC酶活性测定。
:1g酶粉(1ml酶液)于50℃,每分钟水解1%CMC溶液产生1µg还原糖(以葡萄糖计)的酶量定义为1个CMC酶活力单位。
:
,,50℃水浴保温30分钟,,,同样50℃水浴30分钟,再吸取DNS2ml摇匀后,具塞,沸水浴反应10分钟,冷却后,补加水至15ml,轻轻上下摇匀,用空白调零点,于550nm下测OD值。

A×D×5×1000
CMC酶活力=————————